microRNA干扰Id3基因表达对A549细胞增殖和凋亡功能的影响

作     者：陈芳芳 李晓军 庞小娟 赵晓琴 王凯 罗冰 虞伟 

作者机构：南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所江苏南京210002 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2010年第26卷第9期

页      面：852-855,857页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：江苏省"科教兴卫"医学重点人才基金课题(RC2007117) 南京军区医药卫生科研项目重点课题(07Z032) 

主　　题：RNA干扰 microRNA Id3 共转染 凋亡 

摘      要：目的:研究微小RNA(miRNA)干扰细胞分化抑制因子3(Id3)基因表达对人肺腺癌细胞株A549细胞体外增殖和凋亡作用的影响。方法:构建含靶向Id3 mRNA的miRNA所对应寡核苷酸的重组干扰载体pcDNATM6.2-GW/EmGF-PmiRId3(pcDNA/miRId3),通过脂质体转染技术将miRNA干扰质粒pcDNA/miRId3和含Id3基因的重组表达载体pEGFP/Id3共转染A549细胞。荧光显微镜观察EGFP表达情况;流式细胞术(FCM)分析转染24 h后A549细胞的EGFP表达效率;半定量RT-PCR和Western blot技术检测转染后A549细胞内Id3 mRNA及蛋白的表达;MTT法和Annexin V-FITC/7-AAD双染法结合FCM检测靶向Id3基因的miRNA转染A549细胞后对增殖和凋亡的影响。结果:RT-PCR和Western blot结果表明,将pEGFP/Id3和pcDNA/miRId3共转染A549细胞24 h后,A549细胞中外源性Id3 mRNA和Id3蛋白质的表达量均明显受到抑制。MTT和Annexin V/7-AAD双染法结果表明,pEGFP/Id3转染A549细胞24 h后,对A549细胞增殖功能有明显抑制作用,细胞早期凋亡率明显增加,与pEGFP对照组相比均呈统计学差异(P0.01),但pEGFP/Id3与pcD-NA/miRId3共转染A549细胞后,细胞增殖率和凋亡率均未发生明显变化。结论:外源性Id3基因在A549细胞中的表达能够抑制细胞增殖并诱导凋亡,同时导入靶向Id3 mRNA的miRNA干扰质粒pcDNA/miRId3,可逆转外源性Id3表达对细胞增殖的抑制和致凋亡作用,重组MiRNA表达载体的构建及应用为研究Id3致A549细胞增殖抑制和诱导凋亡的作用机制奠定了实验基础。