人肿瘤坏死因子α基因穿梭表达载体的构建和在鱼腥藻7120中的表达

作     者：刘凤龙 张宏斌 施定基 商之狄 林晨 邵宁 彭国宏 张雪艳 张海霞 吴锦银 王捷 徐旭东 江悦华 钟泽璞 赵树进 吴旻 曾呈奎 

作者机构：中国科学院植物研究所北京100093 广州军区广州总医院医学实验科广州510010 中国医学科学院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室北京100021 中国科学院海洋研究所实验海洋生物学开放实验室青岛266071 

出 版 物：《中国科学（C辑）》 (Science in China(Series C))

年 卷 期：1999年第29卷第2期

页      面：217-224页

核心收录：

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 08[工学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金!资助项目 (批准号 :392 80 0 1 6) 

主　　题：肿瘤坏死因子 鱼腥藻 穿梭表达载体 基因表达 

摘      要：报道了人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因穿梭表达载体的构建及其在丝状体蓝藻鱼腥藻 712 0中的表达和鉴定结果 .将质粒pRL rhTNF上hTNFα的cDNA连于pRL 43 9质粒上的PpsbA启动子下游 ,得到中间载体pRL TC .进一步与穿梭质粒pDC 8重组 ,得到可在大肠杆菌和蓝藻中均可表达的穿梭表达载体pDC TNF .pRL rhTNF ,pRL TC和pDC TNF三者在大肠杆菌中的表达量分别为 11.8% ,16 9%和 15 .0 % .通过三亲接合转移将pDC TNF引入鱼腥藻 712 0中并获稳定遗传的转基因株 .从转基因的鱼腥藻 712 0中检测到pDC TNF质粒的存在 ,且在和TNFα的cDNA探针进行的Southern杂交中呈阳性反应 .抽提转基因藻的蛋白样品进行检测 ,在Western印迹中和TNFα单克隆抗体呈阳性反应 .采用TNF对L92 9细胞的细胞毒性方法 ,证明转基因藻粗提液中 ,TNF确有细胞毒活性 .