多质粒共转化组合筛选方法构建木糖利用酿酒酵母的研究

作     者：刘宝利 刘高冈 林秋卉 李炳志 元英进 LIU Bao-li;LIU Gao-gang;LIN Qiu-hui;LI Bing-zhi;YUAN Ying-jin

作者机构：天津大学化工学院系统生物工程教育部重点实验室天津化学化工协同创新中心天津300072 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2016年第36卷第12期

页      面：86-97页

核心收录：

学科分类：08[工学] 09[农学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家重点基础研究发展计划(2013CB733601) 国家自然科学基金(21390203)资助项目 

主　　题：合成生物学 酿酒酵母 共转化 组合筛选 木糖利用 

摘      要：快速得到目标代谢路径相关基因的大量组合以及实现组合库的高效筛选,是合成生物学领域中一个重要的研究内容。建立了三质粒共转化酵母菌株组合筛选方法并以XR-XDH木糖代谢路径在酿酒酵母中的应用为例进行阐释。首先利用Yeast Golden Gate连接法在三种不同表达载体上构建不同启动子控制下的XR、XDH、XK单个基因的表达盒,然后直接用三质粒共转化系统构建100种不同组合的重组酵母。经过木糖平板初筛筛选出16个能利用木糖的组合,将这16个组合对应的三基因表达模块组装至同一表达载体后转化底盘菌株,再通过限氧发酵进行复筛,最终筛选出木糖代谢能力、木糖醇和乙醇生成速率最优菌株Sc-LQH35(TDH3p-XR-ACS2t-FBA1pXDH-ENO2t-PDC1p-XK-ASC1t),在培养基中含有20 g/L木糖的条件下,其木糖醇产量为7.14g/L,乙醇产量为5.92 g/L,而菌株Sc-LQH39(TDH3p-XR-ACS2t-FBA1p-XDH-ENO2t-ZEO1p-XKASC1t)则表现出较强的木糖醇生产能力,特别在限氧发酵时,其木糖醇得率可高达0.71 g/g。三质粒共转化组合筛选方法实现了木糖利用菌株的灵活构建和快速筛选,并成功得到具有优良木糖利用性能的酿酒酵母菌株,表明其在重组菌株的构建和筛选工作中有一定的应用价值。