藁本内酯对重组人热休克蛋白60诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症反应的作用及机制

作     者：高颖 陈蕊 顾宁 何小丽 杨志军 左可可 Gao Ying;Chen Rui;Gu Ning;He Xiaoli;Yang Zhijun;Zuo Keke

作者机构：南京中医药大学博士后流动站210046 南京中医药大学第一临床医学院中医系 南京中医药大学第三附属医院心内科 

出 版 物：《中华心血管病杂志》 (Chinese Journal of Cardiology)

年 卷 期：2016年第44卷第9期

页      面：793-798页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81173399) 中国博士后科学基金(2015M571792) 江苏省博士后科研资助项目(1401137C) 

主　　题：藁本内酯 炎症 热休克蛋白质类 

摘      要：目的 探讨藁本内酯（LIG）对重组人热休克蛋白60（HSP60）诱导的THP-1源性巨噬细胞炎症反应的作用及机制.方法 THP-1细胞经佛波酯诱导分化为巨噬细胞后,以免疫荧光法筛选出髓样分化因子88（MyD88）的siRNA最佳转染浓度.将巨噬细胞分为6组（n=3）,包括空白对照组（siRNA转染试剂）、模型组（siRNA转染试剂＋HSP60 10 mg/L）、阴性对照组（MyD88阴性对照品＋ HSP60 10 mg/L）、RNAi组（MyD88 siRNA＋ HSP60 10 mg/L）、LIG组（siRNA转染试剂＋HSP6010 mg/L＋ LIG 20 mg/L）和RNAi＋ LIG组（MyD88 siRNA＋ HSP60 10 mg/L＋ LIG 20 mg/L）.采用Western blot法检测巨噬细胞中MyD88及磷酸化核因子-κB （p-NF-κB）的蛋白表达水平,采用ELISA法检测细胞培养上清液中的肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）含量.结果 （1）模型组的MyD88（1.196±0.125比0.341±0.063,P0.01）和p-NF-κB（0.817±0.034比0.312 ±0.046,P0.01）蛋白相对表达水平均高于空白对照组;RNAi组的MyD88（0.554±0.043）和p-NF-κB （0.538±0.063）蛋白相对表达水平均低于模型组（P均0.01）,而高于空白对照组（P均0.05）;LIG组MyD88（0.694±0.087）及p-NF-κB（0.669±0.043）蛋白相对表达水平均低于模型组（P0.05或0.01）,而高于RNAi组（P均0.05）及空白对照组（P均0.01）;RNAi＋ LIG组的MyD88（0.409±0.069）和p-NF-κB（0.395±0.046）蛋白相对表达水平均低于模型组（P均0.01）及LIG组（P0.05或0.01）,与空白对照组比较差异无统计学意义（P均0.05）,p-NF-κB蛋白相对表达水平低于RNAi组（P0.05）.（2）模型组的TNF-α[（312.24±28.69） ng/L比（5.99±1.03） ng/L,P0.01]和IL-6[（233.45±57.77） ng/L比（2.25±0.67） ng/L,P0.01]含量均高于空白对照组;RNAi组的TNF-α[（235.66 ±25.12） ng/L]和IL-6[（131.59±13.99） ng/L]含量均低于模型组（P均0.01）;LIG组的TNF-α[（258.13 ±44.80） ng/L]和IL-6[（175.92±28.27） ng/L]含量均低于模型组（P均0.05）,而高于空白对照组（P均0.01）,IL-6含量高于RNAi组（P0.01）;RNAi＋ HG组的TNF-α[（88.57±16.10） ng/L]和IL-6[（59.99±10.31） ng/L]含量均低于模型组、RNAi组和LIG组（P0.05或0.01）.结论 MyD88/NF-κB是人热休克蛋白60诱导THP-1源性巨噬细胞发生炎症反应的信号通路之一,藁本内酯可通过该信号通路发挥抗炎作用.