VP22与EGFP、3种弓形虫抗原融合表达重组质粒的构建与鉴定

作     者：王娜 刘彦双 刘宁 金超 张喜路 金月 薛书江 WANG Na LIU Yan-shuang LIU Ning JIN Chao ZHANG Xi-lu JIN Yue XUE Shu-jiang

作者机构：延边大学农学院延吉133002 龙井市畜牧站龙井133400 龙井市畜牧业管理局龙井133400 梅河口市畜牧总站梅河口135000 大连市金州新区动物卫生监督所大连116100 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2016年第43卷第11期

页      面：2859-2865页

学科分类：09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然基金(31460657) 吉林省科技厅青年科研基金(20150520129JH) 

主　　题：细胞渗透肽VP22 弓形虫 真核表达 

摘      要：为了探索新型弓形虫疫苗的传递系统,本试验分别构建了细胞渗透肽VP22与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合表达的重组质粒(pcDNA-VP22-EGFP),以及细胞渗透肽VP22与3种弓形虫抗原融合表达的重组质粒(pcDNA-VP22-SAG1、pcDNA-VP22-GRA4、pcDNA-VP22-AMA1)。经PCR鉴定、酶切鉴定和序列测定后,将重组质粒pcDNA-VP22-EGFP转染COS7细胞,通过荧光显微镜和RT-PCR检测,验证VP22-EGFP基因在COS7细胞中的表达情况。PCR鉴定、酶切鉴定和序列测定结果显示所有重组质粒均构建正确。转染72h后的细胞,在荧光显微镜下成功观察到绿色荧光。RT-PCR扩增得到了大小为1 449bp的目的条带,与预期结果一致。结果表明,重组质粒构建成功。