基于T7启动子表达系统的牛副流感病毒3型微型基因组的构建与拯救

作     者：姜男 郑妍鹏 蒋桂云 张伟 焦月盈 付远辉 彭向雷 何金生 

作者机构：北京交通大学生命科学与生物工程研究院北京100044 

出 版 物：《微生物学报》 (Acta Microbiologica Sinica)

年 卷 期：2016年第56卷第11期

页      面：1746-1754页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 1002[医学-临床医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主　　题：牛副流感病毒3型 微型基因组 反向遗传学 拯救 

摘      要：【目的】通过负链RNA病毒反向遗传学操作,构建并拯救以T7启动子表达系统为基础的牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)微型基因组。【方法】分别构建表达该病毒NP、P和L蛋白的辅助质粒px8δT-PT1-b PIV3-NP、px8δT-PT1-b PIV3-P和px8δT-PT1-b PIV3-L以及含增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)开放读码框(Open reading frame,ORF)、BPIV3前导序列(Leader region)、转录起始信号(Gene start signal,GS)、转录终止信号(Gene end signal,GE)和尾随序列(Trailer region)等顺式作用元件(Cis-acting elements)的微型基因组质粒p SC11-b PIV3-EGFP,鉴定正确后,采用2种不同方法拯救BPIV3微型基因组,并通过观察荧光表达情况判断是否拯救成功。【结果】成功构建了基于T7启动子表达系统的BPIV3微型基因组,并实现了拯救。【结论】该系统的成功构建,有助于今后对BPIV3开展基因修饰研究。