橙色荧光蛋白——绿色荧光蛋白GFPxm的改造

作     者：罗文新 陈敏 程通 管宝全 李少伟 李少菁 张军 夏宁邵 LUO Wen Xin CHEN Min CHENG Tong GUAN Bao Quan LI Shao Wei LI Shao Jing ZHANG Jun XIA Ning Shao * (Ministry of Education, Cell Biology and Tumor Cell Engineering Laboratory, Xiamen University, Xiamen 361005, China)

作者机构：厦门大学细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2003年第19卷第1期

页      面：56-62,T001页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金："8 63"计划海洋领域青年基金 (No .819 Q 0 6) "863"计划资源环境技术领域青年基金 (No .2 0 0 1AA62 812 0 ) 国家自然科学基金(No .C0 10 40 10 1) 福建省自然科学基金 (No .C0 0 10 0 0 1) 

主　　题：橙色荧光蛋白 绿色荧光蛋白 GFPxm 改造 基因标记 突变型 荧光光谱 荧光强度 

摘      要：最近报道了从大型多管水母中分离出新的gfp基因。经大肠杆菌表达并纯化出的绿色荧光蛋白 (GFPxm)具有 4 76nm的激发峰和 4 96nm的发射峰 ,但是只能在低温下成熟的缺点限制了它的应用。这里进一步报道GFPxm的 12种突变型。在大肠杆菌中的表达结果表明 ,有 7种突变型在 37℃条件下产生高的荧光强度。在 2 5、32和 37℃条件下表达 6h ,GFPxm16、GFPxm18和GFPxm19的相对荧光强度均高于增强型绿色荧光蛋白 (EGFP) ,而GFPxm16和GFPxm16 3在 4 2℃高温表达时仍能保持高的荧光强度。这 7种突变型中的 4种在哺乳动物细胞中已获得良好表达。此外 ,有 6种突变型的荧光光谱红移 ,目前所达到的最长激发峰为 5 14nm、最长发射峰为 5 2 5nm。另外有 3种突变型具有包括紫外在内的两个激发峰 ,1种突变型只有单一的紫外激发峰。首次报道具有橙色荧光的突变型OFPxm ,它的激发峰为 5 0 9nm、发射峰为 5 2 3nm。 5 2 3nm属于黄绿色 ,但肉眼看到的蛋白为橙色。OFPxm在高温下可得到高水平表达且很好地成熟 ,但是因为低的量子产率而荧光强度相对较低。