Smoothened慢病毒干扰载体的构建及其对人牙周膜干细胞增殖与分化的影响

作     者：张洁 常慧君 李雨轩 舒绍兵 罗金英 徐志玲 汤玲 杨彦春 周继祥 

作者机构：第三军医大学西南医院口腔科重庆400038 四川省军区门诊部口腔科成都610041 德阳市第二人民医院口腔科四川德阳618000 武警重庆总队机关门诊部口腔科重庆401147 重庆大学生物医学工程学院重庆400044 

出 版 物：《第三军医大学学报》 (Journal of Third Military Medical University)

年 卷 期：2013年第35卷第11期

页      面：1133-1136页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

主　　题：Smoothened RNA干扰 慢病毒 人牙周膜干细胞 

摘      要：目的体外构建及筛选人Smoothened(SMO)基因的慢病毒干扰载体,使用此载体下调人牙周膜干细胞(human periodontal ligament stem cells,PDLSCs)中SMO基因表达并检测其对细胞增殖与分化的影响。方法针对人SMO基因设计3条干扰序列,构建RNA干扰慢病毒载体,在293FT细胞中包装病毒液并转染293A细胞,通过实时荧光定量PCR检测干扰效率,得到具有最佳干扰效率的病毒后,转染PDLSCs,用Western blot检测其对PDLSCs中SMO基因的干扰效果及对细胞分化的影响,CCK-8法检测其对PDLSCs增殖的影响。结果成功构建3个SMO慢病毒干扰载体(pGP-SMO1、pGP-SMO2、pGP-SMO3),通过转染293A细胞并进行实时荧光定量PCR检测后,得到pGP-SMO1具有最佳干扰效率,转染后SMO mRNA水平下降到对照的(28.5±2.5)%。利用此病毒能够很好地转染体外培养的PDLSCs,并使PDLSCs中SMO蛋白水平下降80%。进一步检测细胞增殖发现,与未转染组比较,SMO下调后PDLSCs增殖变慢[(1.09±0.20)vs(1.86±0.21),P0.01]。同时也导致成骨分化标志物Runx2的蛋白表达下调。结论利用慢病毒介导的干扰病毒载体成功干扰了PDLSCs SMO基因的表达,SMO基因的下调会导致PDLSCs增殖减慢,成骨分化能力减弱。