温度、冻存液体积和操作时间对小鼠卵子Cryotop玻璃化冻融复苏率的影响

作     者：饶金鹏 邱枫 刘青 蔡益婷 金敏 金帆 RAO Jinpeng;QIU Feng;LIU Qing;CAI Yiting;JIN Min;JIN Fan

作者机构：浙江大学医学院附属第二医院生殖医学中心浙江杭州310052 浙江大学医学院附属妇产科医院生殖医学中心浙江杭州310006 

出 版 物：《中国医药导报》 (China Medical Herald)

年 卷 期：2016年第13卷第27期

页      面：8-11页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071008[理学-发育生物学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81571500) 

主　　题：玻璃化冷冻 小鼠 卵母细胞 温度 体积 处理时间 复苏率 

摘      要：目的 探讨Cryotop法中冷冻操作环境温度、加载覆盖的保护液微滴体积以及投入液氮前暴露于高浓度冷冻保护剂（CPA）的时间对小鼠MⅡ期卵子玻璃化冻融效果的影响。方法 对6周龄KM系小鼠促排卵、脱颗粒细胞以获得形态良好的MⅡ期卵子,用Cryotop法对其进行玻璃化冻融,卵母细胞随机分组后实验方案如下：根据冷冻环境温度的不同,设置37℃操作组和22℃操作组;根据薄膜上包被的保护液微滴体积的不同,设置〈0.1μL组、0.1~0.5μL组和〉0.5~1.0μL组;根据与CPA的接触时间的不同,将冷冻卵子分为30~40 s暴露组、〉40~90 s暴露组和〉90~180 s暴露组。随后对各组卵母细胞的复苏率进行统计比较。结果 22℃操作组小鼠卵子的复苏率为81.4%,显著高于37℃操作组的50.7%,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。选择22℃的操作环境,〈0.1μL组、0.1~0.5μL组、〉0.5~1.0μL组复苏率（85.7%、90.5%、83.2%）比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。〉90~180 s CPA暴露组的卵子复苏率为74.7%,低于30~40 s暴露组（83.3%）和〉40~90 s暴露组（78.9%）,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 使用Cryotop法冻融卵母细胞时,不必刻意追求〈0.1μL的保护液加载体积。卵子在高浓度CPA中的暴露时间不宜过长,且控制在30~90 s内对其存活率无明显影响。在常温（22℃）环境下进行操作可改善复苏结局。