分离植物目的基因全长cDNA和启动子的新方法——快速定位转录起始位点(RITIS)

作     者：冯丽 任茂智 罗洪发 何光华 Feng Li;Ren Maozhi;Luo Hongfa;He Guanghua

作者机构：西南大学农学与生命科学学院重庆400716 上海交通大学生命科学与技术学院上海200030 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2006年第4卷第1期

页      面：23-28页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：the National Natural Science Foundation of China Program (Grant No. 30571002) 

主　　题：启动子 全长cDNA 转录起始位点 

摘      要：启动子是调控外源基因在植物体内表达的“开关。随着植物转基因技术的广泛应用,无论是基础研究还是应用研究,人们希望能够充分利用启动子来准确控制外源基因在植物体内的表达,使目的基因的“开和“关、表达的“多和“少、在“何地和“何时表达等,能够听从人的指挥,以实现植物育种的分子设计。因此,快速分离和鉴定植物体内各种特异启动子已经成为植物基因工程研究的热点和难点。本文在互补末端连接反向PCR(CELI-PCR)技术基础上建立起一种快速分离目的基因全长cDNA和启动子序列的新方法。该方法利用CELI-PCR进行染色体连续步移,获取足够长的目的基因及其上游基因组DNA序列,再根据转录起始位点是目的基因转录本和启动子的分界点,其下游转录本中的外显子可通过RT-PCR扩增,而上游启动子序列则不能被RT-PCR扩增这一特点,借助RT-PCR进行cDNA连续步移,直到获得全长cDNA,确定启动子基因5 非翻译区的位置,进而精确定位转录起始位点。从而获取目的基因准确的启动子序列和全长cDNA序列。因此,建立在CELI-PCR基础上的RITIS技术,可绕过繁琐的构建cDNA库和5 -RACE等方法快速分离目的基因全长cDNA和启动子序列。