猪圆环病毒2d亚型衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达

作     者：黄娟 袁飞 韩先杰 李桂梅 单虎 HUANG Juan;YUAN Fei;HAN Xian-Jie;LI Gui-Mei;SHAN Hu

作者机构：青岛农业大学山东省高校预防兽医学重点实验室 

出 版 物：《农业生物技术学报》 (Journal of Agricultural Biotechnology)

年 卷 期：2016年第24卷第9期

页      面：1346-1353页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家科技基础性工作专项项目(No.2012FY111000) 山东省现代农业产业技术体系生猪产业创新团队(No.SDAIT-06-022-08) 山东省自主创新及成果转化专项(No.2014ZZCX07105) 

主　　题：猪圆环病毒2d亚型 衣壳蛋白 杆状病毒表达系统 基因分型 

摘      要：为了在昆虫细胞中表达猪圆环毒病2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)衣壳蛋白,本研究设计合成引物从临床病料中扩增获得猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)山东株衣壳蛋白基因缺失核定位区的序列,并进行序列分析。将该片段克隆到杆状病毒供体载体p Fast Bac-1上,然后转化大肠杆菌(Escherichia coli)DH10-Bac感受态细胞,获得重组穿梭杆粒,将该杆粒转染到sf9昆虫细胞中,观察重组杆状病毒致细胞病变效应,并采用PCR、间接免疫荧光实验、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot鉴定衣壳蛋白的表达情况。结果表明,扩增获得的猪圆环病毒山东株属于PCV2d亚型,与我国目前使用的商品化疫苗株(PCV2a及PCV2b亚型)在160~180 aa抗原位点有差异。成功构建了重组供体质粒p Fast Bac1-PCV2d-Cap和重组穿梭杆粒Bacmid-PCV2d-Cap,获得的重组杆状病毒在昆虫细胞中成功表达了约24 k D的PCV2d-Cap,该蛋白可以与猪圆环病毒阳性血清及His标签抗体发生反应,证明具有良好的反应原性。本研究是我国首次采用杆状病毒系统表达PCV2d亚型衣壳蛋白,为制备PCV2d亚单位疫苗以及酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒、防范PCV2d亚型流行提供了理论依据。