犬冠状病毒核酸探针的制备及其基因序列的测定与比较

作     者：胡桂学 夏咸柱 鲍志宏 黄海龙 高云航 

作者机构：吉林农业大学动物科技学院吉林长春130118 解放军军需大学军事兽医研究所吉林长春130062 吉林省双辽市畜牧局吉林双辽136400 

出 版 物：《兽医大学学报》 (CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE)

年 卷 期：2003年第23卷第3期

页      面：228-230页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：军队"九五"医药卫生重点项目 ( 98Z0 3 5 ) 

主　　题：犬冠状病毒 序列比较 核酸探针 探针制备 基因序列 

摘      要：采用 RT- PCR方法扩增犬冠状病毒 (CCV) YS1、CI1和 NL- 1 8株 5′端部分 S基因序列 ,以随机插入 DNA法对CCV YS1株纯化的 PCR产物标记 32 P同位素 ,制备核酸探针 ,并与 3株 CCV反转录产物杂交。用平端连接法将 3株CCV PCR产物克隆于 p U C1 9Sma 位点或 p GEM- T载体中 ,经 PCR鉴定为正确重组质粒。以双脱氧末端终止法测定了重组质粒的 c DNA核苷酸序列 ,并用 DNASIS计算机软件进行多重比较分析 ,绘制系统树。结果表明 ,所制备的核酸探针可与 3株 CCV反转录产物杂交 ,其核苷酸序列与多株 CCV相应序列的同源性高达 91 .9%～ 99.1 % ,为CCV的保守区。由此说明 ,制备的核酸探针可用于犬