基于CRISPR/Cas9系统的猪内皮细胞UHRF1定向编辑及其对单核细胞趋化蛋白-1影响的研究

作     者：邱奕雁 朱峰 夏小龙 张小骞 陈扬 杨欣建 

作者机构：深圳市第二人民医院脊柱外科广东深圳518035 

出 版 物：《临床和实验医学杂志》 (Journal of Clinical and Experimental Medicine)

年 卷 期：2016年第15卷第15期

页      面：1462-1465页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：深圳市科创委课题(编号:JCYJ20150330102720149) 

主　　题：内皮细胞 定向编辑 单核细胞趋化蛋白-1 基质金属蛋白酶 细胞凋亡 

摘      要：目的对基于CRISPR/Cas9系统的猪内皮细胞泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)定向编辑进行研究,并分析其对单核细胞趋化蛋白-1表达的影响。方法靶向设计并构建UHRF1基因外显子区域gRNA序列载体,并将其与h Cas9载体共转染猪内皮细胞制备单克隆抗体,并分析单核细胞趋化蛋白-1表达变化。结果本研究共获重组质粒5个,转染后获得细胞株a、细胞株b和细胞株c三株UHRF1蛋白表达极低细胞株;UHRF1蛋白敲除后单核细胞趋化蛋白-1和MMP9、IL1、IL2及Bax蛋白表达分析水平明显降低而Bcl2表达明显升高,且与野生型细胞株相比差异有显著的统计学意义(P0.05)。结论成功获得基于CRISPR/Cas9系统的猪内皮细胞UHRF1定向编辑,且获得细胞株内单核细胞趋化蛋白-1表达明显降低。