抗体重链可变区框架I区对抗体分泌的影响

作     者：朱莉莉 李川 李建东 孙丽娜 梁米芳 李德新 ZHU Li-li;LI Chuan;LI Jian-dong;SUN Li-na;LIANG Mi-fang;LI De-xin

作者机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京100052 

出 版 物：《病毒学报》 (Chinese Journal of Virology)

年 卷 期：2008年第24卷第3期

页      面：172-177页

核心收录：

学科分类：07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 090102[农学-作物遗传育种] 0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 10[医学] 

基　　金：国家863计划抗体功能化制备新技术(2006AA02A252) 

主　　题：抗体可变区 氨基酸突变 真核表达 

摘      要：抗体重链可变区框架I区(FR-I)对抗体在原核细胞中的分泌表达具有显著的影响,单个氨基酸的改变即可导致抗体分子分泌能力的丧失。为了探索抗体在哺乳动物细胞中的高效表达,我们对一株不能有效分泌的人源抗狂犬病病毒抗体pCMV-RV/VH的FR-I区氨基酸编码基因进行定点突变研究。实验显示,抗体重链可变区FR-I区H6位的氨基酸由Glu突变为Gln之后,抗体的分泌表达水平得到了显著的提高,并且与抗原特异性结合的能力也明显增强。通过免疫荧光法对抗体在细胞内的转运过程进行了初步的探讨,发现能够有效分泌的抗体与无分泌表达的抗体都能够在细胞内进行正常的转录和翻译,进入内质网并转运至高尔基体,而且胞内表达水平基本一致。我们认为分泌能力的不同可能是FR-I区影响抗体分子的折叠与装配所致,其中该区H6位氨基酸的性质能够显著影响抗体在哺乳动物细胞中的分泌。本研究以抗体重链可变区FR-I区氨基酸为焦点,对基因工程抗体在真核细胞中高效表达的影响因素进行了探索,为改进抗体规模化生产提供了依据。