NGF/MAG双基因共表达腺病毒修复大鼠周围神经损伤的实验研究

作     者：陈渝 邓忠良 翁政 陈诗谋 童伟 CHEN Yu;DENG Zhongliang;WENG Zheng;CHEN Shimou;TONG Wei

作者机构：重庆市第九人民医院骨一科重庆400070 重庆医科大学附属第二医院骨科 

出 版 物：《中国修复重建外科杂志》 (Chinese Journal of Reparative and Reconstructive Surgery)

年 卷 期：2016年第30卷第8期

页      面：1026-1033页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(81272005) 重庆市北碚区科教委资助项目(2008-10)~~ 

主　　题：坐骨神经损伤 NGF 髓磷脂相关糖蛋白 腺病毒 神经修复 基因治疗 大鼠 

摘      要：目的构建携带NGF及髓磷脂相关糖蛋白（myelin associated glycoprotein,MAG）基因序列的双基因共表达腺病毒（adenovirus expressing NGF and MAG,Ad-NGF-MAG）,探讨其在大鼠坐骨神经损伤修复中的作用。方法将NGF和MAG共同克隆至5型腺病毒穿梭质粒p CA 13,并在HEK 293细胞中包装得到重组腺病毒Ad-NGF-MAG并测序鉴定。取雄性SD大鼠32只,体质量180~200 g;随机分成4组（n=8）：对照组（正常对照）、空病毒组（Ad组）、单独表达NGF组（Ad-NGF组）和共表达NGF、MAG组（Ad-NGF-MAG组）。Ad组、AdNGF组和Ad-NGF-MAG组大鼠制备右侧坐骨神经损伤模型后,分别于术侧腓肠肌注射空腺病毒、Ad-NGF及AdNGF-MAG（1×108 PFU）,隔天1次,共3次。对照组仅暴露右侧坐骨神经后关闭切口,术后对应时间点注射生理盐水10μL。术后31 d,分别行坐骨神经功能指数（sciatic nerve function index,SFI）、神经电生理检测;切取坐骨神经标本,行RT-PCR及Western blot检测NGF及MAG m RNA及蛋白表达水平,以及组织学观察。结果实验成功构建重组腺病毒Ad-NGF和Ad-NGF-MAG。32只大鼠术后均成活,切口Ⅰ期愈合。Ad-NGF-MAG组SFI、神经传导速度、诱发电位波幅、潜伏期均明显优于Ad-NGF组和Ad组,但未达对照组水平,比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。Ad-NGF-MAG组内MAG m RNA和蛋白表达最高,NGF m RNA和蛋白表达高于对照组和Ad组,比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。组织学观察显示,对照组神经连续性好,Ad组神经纤维层次混乱,Ad-NGF组神经纤维层次结构清晰,局部断端再生良好,但神经纤维结构紊乱;Ad-NGF-MAG组神经纤维生长有序,神经直径较Ad-NGF组粗,神经纤维结构良好。结论坐骨神经损伤后修复过程中,腺病毒介导NGF与MAG共表达,既可促进神经纤维生长,又可抑制神经异常分支形成,促进神经结构与功能的恢复。