转化生长因子β1受体抑制剂SD-208对人增生性瘢痕的作用

作     者：李明 方勇 姚敏 俞为荣 倪涛 顾钏 杨鹏高 毛志刚 Li Ming;Fang Yong;Yao Min;Yu Weirong;Ni Tao;Gu Chuan;Yang Penggao;Mao Zhigang

作者机构：上海交通大学医学院附属第九人民医院烧伤整形科201999 

出 版 物：《中华烧伤杂志》 (Chinese Journal of Burns)

年 卷 期：2016年第32卷第7期

页      面：389-395页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金（81272081） 

主　　题：瘢痕 转化生长因子β1 细胞增殖 细胞运动 微丝 SD-208 

摘      要：目的探讨TGF—β1受体抑制剂SD-208对人增生性瘢痕的作用及其机制。方法取。i废弃人增生性瘢痕组织，分离瘢痕Fb，并进行传代培养，采用第5代细胞进行以下实验。（1）按照随机数字表法（分组方法下同）将细胞分为空白对照组及0．5、1．0、3．0、5．0μmol／LSD-208组，每组6孔。空白对照组加入lμLPBS，后4组分别加入1μL0．5、1．0、3．0、5．0μmol／LSD-208，培养12h，细胞计数试剂盒8及酶标仪检测细胞增殖活性（以吸光度值表示）。根据细胞增殖活性结果选取适宜物质的量浓度的SD-208用于后续实验。（2）另取细胞，分为空白对照组及1、3μmol／LSD-208组，同（1）处理，每组8孔，Transwell法检测迁移细胞数。（3）另取细胞，同（2）分组处理，罗丹明-鬼笔环肽染色，观察细胞微丝形态。（4）另取细胞，同（2）分组处理，蛋白质印迹法检测TGF—p，蛋白表达。（5）取48只BALB／c裸鼠，分为生理盐水组24只与μmol／LSD-208组24只，于背部做长度为1cm的纵行切口，埋置人增生性瘢痕组织块。伤后7d，生理盐水组与1μmol／LSD-208组裸鼠瘢痕内分别多点注射0．05mL生理盐水及1Ixmol／LSD-208，每日注射1次。于首次给药后0（当日）、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20d，取8只裸鼠，电子秤称量体质量；用游标卡尺测量瘢痕面积，计算剩余瘢痕面积百分比。于首次给药后1、2、3周，取出人增生性瘢痕组织块，免疫组织化学染色法检测TGF-β1。蛋白表达。对数据行单因素方差分析、两独立样本t检验。结果（1）空白对照组及0．5、1．0、3．0、5．0μmol／LSD-208组细胞增殖活性分别为1．00±0．03、0．90±0．08、0．68±0．11、0．54±0．04、0．42±0．09，0．5、1．0、3．0、5．0μmol／LSD-208组细胞增殖活性均明显低于空白对照组（t值为2．9～22．1，P〈0．05或P〈0．01）。（2）1、3μmol／LSD-208组迁移细胞数均明显少于空白对照组（t值分别为6．5、6．4，P值均小于0．01）。（3）与空白对照组比较，1、3μmol／LSD-208组细胞的微丝荧光强度减弱，伪足伸出减少。（4）空白对照组及1、3μmol／LSD-208组细胞TGF-β1。蛋白表达量分别为1．00±0．08、0．80±0．08、0．61±0．05，1、3μmol／LSD-208组细胞TGF-β1。蛋白表达量均明显低于空白对照组（t值分别为4．0、9．2，P值均小于0．01）。（5）生理盐水组、1μmol／LSD-208组裸鼠各时相点体质量相近（t值为0．2～1．1，P值均大于0．05）。2组裸鼠剩余瘢痕面积百分比随给药时间延长降低，首次给药后6～20d，μmol／LSD-208组裸鼠剩余瘢痕面积百分比明显小于生理盐水组（t值为1．8～15．9，P〈0．05或P〈0．01）。首次给药后1、2、3周，2组裸鼠体内人增生性瘢痕TGF—β1，蛋白表达量均呈下降趋势，且1μmol／LSD-208组裸鼠体内人增生性瘢痕TGF-B，蛋白表达量明显低于生理盐水组（t值为6．2～19．1，P值均小于0．01）。结论SD-208对人增生性瘢痕有明显的抑制作用，其作用机制与抑制内源性TGF-β1．蛋白表达有关。