实时荧光定量PCR法检测草莓镶脉病毒

作     者：苗立祥 荣宁宁 张豫超 杨肖芳 张琴 张慧琴 蒋桂华 MIAO Li-xiang;RONG Ning-ning;ZHANG Yu-chao;YANG Xiao-fang;ZHANG Qin;ZHANG Hui-qin;JIANG Gui-hua

作者机构：浙江省农业科学院园艺研究所浙江杭州310021 浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004 舟山市定海区农业技术推广中心站浙江舟山316000 

出 版 物：《浙江农业学报》 (Acta Agriculturae Zhejiangensis)

年 卷 期：2016年第28卷第6期

页      面：1030-1036页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090201[农学-果树学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31201613) 浙江省农业科学院人才培养项目(2015R05R08E01) 浙江省自然科学基金项目(LY16C150004) 浙江省农业新品种选育专项(2012C129048) 

主　　题：草莓镶脉病毒 SYBR Green-Ⅰ 实时荧光定量PCR 

摘      要：为了建立一种特异、灵敏、快速检测草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的SYBR Green-Ⅰ实时荧光定量PCR方法,根据已有的检测SVBV的引物信息,合成引物,对不同草莓品种进行PCR扩增。经过克隆、测序及序列比对得到了感染SVBV的阳性植株,利用此植株PCR扩增产物构建重组质粒作为标准品,优化了PCR反应体系,标准曲线的循环阈值(Ct值)与模板浓度有良好的线性关系(R2=0.999 1);进行了灵敏度和重复性试验,敏感性可达到10~1拷贝·μL^(-1),约为普通PCR的1 000倍,重复性好;并与常规PCR方法进行了比较,成功建立了检测SVBV的实时荧光定量PCR法。用该方法检测了部分草莓品种的DNA样品,结果表明,大部分植株都带有SVBV。该方法具有很高的灵敏性和重复性,可用来快速检测草莓植株是否感染SVBV。