应用实时荧光PCR技术检测构巢曲霉的初步研究

作     者：刘金华 贺丹 史艳宇 张宇 王丽 LIU Jin-hua;HE Dan;SHI Yan-yu;ZHANG Yu;WANG Li

作者机构：吉林出入境检验检疫局长春130062 吉林大学基础医学院病原生物学教研室长春130021 吉林省产品质量监督检验研究院长春130022 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2008年第28卷第10期

页      面：95-99页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 07[理学] 071005[理学-微生物学] 10[医学] 

基　　金：国家质检总局科研计划资助项目(2007IK150) 

主　　题：构巢曲霉 实时荧光PCR 检测 

摘      要：目的:根据构巢曲霉(Aspergillus nidulans)3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因特异位点设计并合成Taqman探针及引物,建立构巢曲霉实时荧光PCR检测方法。方法:应用lasergene7.1软件对构巢曲霉与13种常见曲霉主要包括黑曲霉(***)、烟曲霉(***)、杂色曲霉(***)、土曲霉(***)、黄曲霉(***)、温特曲霉(***)、寄生曲霉(***)、泡盛曲霉(***)、米曲霉(***)、棒曲霉(***)、赤曲霉(***)、亮白曲霉(***)及赭曲霉(***)进行GAPDH基因序列比对分析,在特异位点设计引物和探针,建立构巢曲霉实时荧光PCR检测方法,并对该方法进行特异性及敏感性分析。结果:用曲霉属22种41株不同曲霉及其他属的12株病原真菌验证实验表明,所建立的荧光PCR方法特异性强;检测灵敏度可达4.03×10-12μg/ml的模板DNA。结论:应用实时荧光PCR技术能够有效检测构巢曲霉,该方法具有特异、灵敏、快速等特点,可在实际工作中应用。