可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)及其突变体的表达纯化及生物活性观察

作     者：周京晶 路长林 由振东 ZHOU Jing-jing;LU Chang-lin;YOU Zhen-dong

作者机构：第二军医大学基础部神经生物学教研室上海200433 

出 版 物：《第二军医大学学报》 (Academic Journal of Second Military Medical University)

年 卷 期：2009年第30卷第3期

页      面：319-321页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(30271258 3067244) 国家重点基础研究项目("973"计划 2003CB515407) 上海市重点基金(06JC14008)~~ 

主　　题：可卡因一苯丙胺调节转录肽 突变体 基因表达 纯化 二硫键 

摘      要：目的:表达纯化可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART)及其突变体,观察其对大鼠进食行为的影响。方法:PCR扩增CART活性片段CART55-102cDNA,构建表达CART55-102原核表达载体,并对其68位和94位半胱氨酸残基突变,构建表达CART55-102(Cys68Ser)和CART55-102(Cys94Ser)原核表达菌株,经IPTG诱导表达后,亲和层析纯化3种小肽;行为学技术检测原核表达小肽对大鼠进食行为的影响。结果:获得的重组CART55-102及其突变体的纯度在95%以上,产物得率约75%;CART55-102可显著抑制饥饿大鼠的进食行为,而68和94位突变体对饥饿大鼠的进食行为无明显影响。结论:原核表达系统可以成功制备高纯度CART活性小肽和突变体,68位和94位突变导致CART抑制进食的作用消失。