褶纹冠蚌防御素基因特征与表达

作     者：王鹤 胡宝庆 文春根 胡向萍 程周玉 宁瑞红 WANG He;HU Baoqing;WEN Chungen;HU Xiangping;CHEN Zhouyu;NING Ruihong

作者机构：南昌大学生命科学系生命科学研究院 

出 版 物：《中国水产科学》 (Journal of Fishery Sciences of China)

年 卷 期：2013年第20卷第6期

页      面：1188-1196页

核心收录：

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

基　　金：国家自然基金项目(30960296 31060359) 淡水生态与生物技术国家重点实验室开放基金项目(2013FB09) 江西省教育厅项目(GJJ12024 GJJ10378) 江西省科技攻关项目(2004) 

主　　题：褶纹冠蚌 防御素 基因表达 序列结构 抗菌肽 嗜水气单胞菌 

摘      要：褶纹冠蚌(Cristaria plicata)样本壳长(9.50±1.05)cm、壳高(6.45±0.81)cm,暂养1周。40只随机分成试验组和对照组,每组20只。用Trizol法提取经诱导刺激后0、6、12、24、36、48 h的血液、外套膜、鳃、肝胰腺组织RNA,构建褶纹冠蚌cDNA文库并从中获得防御素基因cDNA全长序列。结果表明,褶纹冠蚌防御素序列全长为514 bp,其中5’UTR有57 bp;3’UTR有242 bp,含有一个poly(A)尾;开放阅读框长度为192 bp,编码63个氨基酸组成的蛋白质,该蛋白N端为1个由23个氨基酸构成的信号肽,成熟肽由40个氨基酸组成,理论等电点为8.72,分子量为7.13 kD。三级结构预测显示其由一个α螺旋和两个β折叠片组成,形成典型的CSαβ结构。通过注射109cell/mL的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)刺激褶纹冠蚌,半定量分析PCR对褶纹冠蚌血液、外套膜、鳃和肝胰腺组织的防御素基因表达,结果表明,诱导前防御素基因在外套膜组织中表达量最高,约为血液和鳃的1.25倍,肝胰腺次之。在诱导0、6、12、24、36、48 h后,对照组的防御素基因表达量在血液和鳃中无明显变化,而在外套膜和肝胰腺中则呈现先略有下降而后上升;试验组防御素基因在血液中12 h时表达量最高,随后略有下降,而在外套膜、鳃和肝胰腺组织中表达量均在0 h时出现峰值,而后呈现下降趋势;外套膜和鳃的表达量分别在24 h和36 h略有上升。本研究通过分析褶纹冠蚌防御素基因全序列,并利用嗜水气单胞菌对褶纹冠蚌进行注射感染,探讨防御素基因的表达规律,以期为防御素对贝类非特异性免疫的影响提供基础依据。