成纤维细胞激活蛋白及其突变体真核表达质粒的构建及鉴定

作     者：赵萌 邵婷如 吕晓智 ZHAO Meng;SHAO Ting-ru;LV Xiao-zhi

作者机构：南方医科大学南方医院口腔科南方医科大学口腔医学院广州510515 

出 版 物：《广东医学》 (Guangdong Medical Journal)

年 卷 期：2016年第37卷第13期

页      面：1909-1912页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:81472536) 广东省科技计划项目(编号:2012B031800139 2014A020212440) 

主　　题：成纤维细胞激活蛋白 真核表达载体 pc DNA3.1(+) 

摘      要：目的 构建并鉴定人成纤维细胞激活蛋白（FAPα）真核表达质粒pc DNA-w FAPα（野生型FAPα）、pc DNA-t FAPα（胞外段FAPα）和pc DNA-m FAPα（缺失624~704位氨基酸的突变型FAPα）。方法 以口腔癌组织总RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增w FAPαc DNA基因片段,连接至真核表达质粒pc DNA3.1（＋）获得重组pc DNA-w FAPα质粒。以重组pc DNA-w FAPα为模板,扩增t FAPα基因片段;用overlap PCR技术,获得m FAPα基因;分别连接至pc DNA3.1（＋）获得重组pc DNA-t FAPα和pc DNA-m FAPα质粒。结果 酶切鉴定和测序验证皆显示pc DNA-w FAPα、pc DNA-t FAPα和pc DNA-m FAPα为正确重组质粒。结论 成功构建人野生型FAPα（w FAPα）、胞外段FAPα（t FAPα）和突变型FAPα（m FAPα）真核表达质粒,为进一步研究FAPα在口腔鳞癌发病过程中的分子机制奠定基础。