多重实时荧光定量PCR检测肠出血性大肠杆菌O157：H7

作     者：金大智 张政 罗芸 程苏云 朱敏 叶菊莲 JIN Da-zhi;ZHANG Zheng;LUO Yun;CHENG Su-yun;ZHU Min;YE Ju-lian

作者机构：浙江省疾病预防控制中心杭州310051 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2009年第29卷第12期

页      面：1135-1139页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治科技重大专项(2008ZX10004-002) 浙江省医药卫生科学研究基金(2007A037) 

主　　题：多重实时荧光定量PCR 肠出血性大肠杆菌O157:H7 检测 靶基因 

摘      要：目的利用多重荧光定量PCR技术，建立一种快速、准确、特异检测肠出血性大肠杆菌O157：H7的定量方法。方法选取肠出血性大肠杆菌O157：H7编码脂多糖基因（rfoE）和编码鞭毛抗原基因（fliC）作为检测的靶基因，设计引物和TaqMan—MGB探针，探针的5’端分别用FAM和HEX进行荧光标记，3’端标记MGB。优化PCR扩增体系，对多重实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性评价，同时进行一定数量临床样本鉴定，与常规方法进行比较。结果本研究所建立的多重实时荧光定量PCR方法可准确、特异地检测和鉴定肠出血性大肠杆菌O157：H7，能够有效甄别肠出血性大肠杆菌O157：H7与非H7菌株，其他菌株均无阳性结果；该方法的灵敏度可达到10CFU／ml；定量检测的批间和批内变异系数均小于5％；对66例临床样本进行评价，结果显示15例肠出血性大肠杆菌O157：H7阳性，2例为肠出血性大肠杆菌O157：非H7阳性，其中16例与常规培养法结果符合，符合率达到98．49％。结论本研究建立的检测肠出血性大肠杆菌O157：H7多重实时荧光定量PCR方法快速，结果准确、可靠，操作简便，为肠出血性大肠杆菌O157：H7的临床诊断、现场流行病学调查和食品安全监测提供了新的鉴定方法。