中国林蛙抗菌肽Temporin-1 CEa基因的真核表达载体构建

作     者：张志崇 王春生 张秋婷 朴善花 苗向阳 安铁洙 

作者机构：东北林业大学生命科学学院 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 

出 版 物：《经济动物学报》 (Journal of Economic Animal)

年 卷 期：2012年第16卷第1期

页      面：26-30页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08008-004B) 国家自然科学基金资助项目(30771538,31000990) 

主　　题：中国林蛙 抗菌肽 绵羊成纤维细胞 瞬时表达 

摘      要：为了建立大量获取中国林蛙抗菌肽的方法,根据GenBank中的中国林蛙皮肤抗菌肽Temporin-1CEa基因的mRNA序列(EU624139)设计一对特异性引物,以提取的中国林蛙皮肤总RNA反转录出的cDNA为模板,将扩增的编码序列与pEASY-T3克隆载体连接获得Tem-T3;利用酶切、连接等分子生物学手段,将GFP基因连入Tem-T3克隆载体,再经酶切获得Tem-GFP片段,并插入真核表达载体pcDNA3.1,最终得到Tem-GFP-pcD-NA3.1重组质粒;利用脂质体转染法将该质粒转入绵羊成纤维细胞,48 h后可在荧光倒置显微镜下观察到GFP的绿色荧光表达;qPCR数据分析显示,与对照组相比,转染Tem-GFP-pcDNA3.1的绵羊成纤维细胞中融合蛋白Tem-GFP的表达量可提高约300倍。本研究为构建Temporin-1CEa基因山羊乳腺特异表达载体提供依据。