抗微小核糖核酸-21治疗对糖尿病肾病模型小鼠肾脏损伤作用的实验研究

作     者：孙佳 沈军 SUN Jia;SHEN Jun

作者机构：杭州市临平区第一人民医院肾内科杭州311100 

出 版 物：《浙江中西医结合杂志》 (Zhejiang Journal of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine)

年 卷 期：2025年第35卷第1期

页      面：13-18页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：余杭区医疗卫生科研项目(No.2019006) 

主　　题：小鼠 糖尿病肾病 肾脏损伤 微小核糖核酸-21 细胞凋亡 

摘      要：目的 探讨抗微小核糖核酸-21 (microRNA-21,miR-21)治疗对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)模型小鼠肾脏损伤的作用。方法 8周龄C57BL/6小鼠随机分为对照组、DN组、DN+miR-21反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASO)组(DN+miR-21-ASO组)、DN+miR-21反义寡核苷酸错配碱基对(MM-ASO)组(DN+miR-21-MM-ASO组)。通过腹腔注射链脲佐菌素构建DN小鼠模型。全自动生化分析仪检测小鼠24 h尿蛋白(urine protein,Upro)、血清肌酐(serum creatinine,Scr)和血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)含量。PAS染色观察小鼠肾脏糖原沉积,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肾脏病理学变化,TUNEL染色观察小鼠肾脏组织细胞凋亡情况。实时定量PCR检测小鼠肾脏组织miR-21的相对表达水平。蛋白质印迹(Western blot)检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)蛋白的表达水平。结果 与对照组比较,DN组小鼠肾脏组织miR-21表达显著上调[(3.23±0.24)比(1.00±0.11),P0.01],24 h Upro、Scr和BUN[(53.87±5.87)mg比(13.83±1.80)mg、(89.35±3.34)μmol/L比(28.27±2.91)μmol/L、(25.79±2.15)mmol/L比(7.36±0.50)mmol/L,P0.01]水平均显著增高;与DN+miR-21-MM-ASO组比较,DN+miR-21-ASO组小鼠肾脏组织miR-21的表达受到抑制[(0.77±0.11)比(3.52±0.27),P0.01],小鼠24 h Upro、Scr和BUN[(29.92±6.06)mg比(50.69±6.93)mg、(68.39±3.75)μmol/L比(87.84±6.63)μmol/L、(17.66±1.04)mmol/L比(23.80±3.16)mmol/L,P0.01]水平明显降低。PAS染色显示,与对照组比较,DN组小鼠肾脏组织系膜和基底膜区PAS染色阳性物质增多,颜色深;与DN+miR-21-MM-ASO比较,DN+miR-21-ASO组小鼠肾脏组织系膜和基底膜区PAS染色阳性物质明显减少且红染区域较少。HE染色表明,与对照组比较,DN组小鼠出现肾小球体积增大和肾小管刷状缘脱离等肾脏损伤表现;与DN+miR-21-MM-ASO组比较,DN+miR-21-ASO组小鼠肾脏损伤显著改善。TUNEL染色表明,与对照组比较,DN组小鼠肾脏组织细胞凋亡显著增加;与DN+miR-21-MM-ASO组比较,DN+miR-21-ASO组小鼠肾脏组织细胞凋亡显著降低。Western blot检测显示,与对照组比较,DN组Bax和cleaved caspase-3表达上调[(3.24±0.26)比(1.00±0.10)、(2.82±0.16)比(1.00±0.13),P 0.01],Bcl-2表达下调[(1.06±0.12)比(4.16±0.41),P0.01];与DN+miR-21-MM-ASO组比较,DN-miR-21-ASO组Bax和cleaved caspase-3表达下调[(2.04±0.19)比(3.20±0.07)、(1.54±0.11)比(3.10±0.13),P0.01],Bcl-2表达上调[(2.05±0.14)比(1.02±0.09),P0.01]。结论 抗miR-21治疗可以明显改善DN模型小鼠的肾脏损伤。