烟草染色体制备体系的建立与优化

作     者：韩梦荞 吴疆 李丽华 王昭懿 邓习 韦凤杰 任民 孙洋洋 李富欣 

作者机构：中国农业科学院烟草研究所 河南省烟草公司南阳市公司 河南省烟草公司洛阳市公司 宁夏大学农学院 河南省烟草公司 

出 版 物：《生物技术通报》 (Biotechnology Bulletin)

年 卷 期：2025年

核心收录：

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：中国烟草总公司重大科技项目(110202201002(JY-02)) 中国烟草总公司河南省公司创新项目(2024410000240025) 中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1610232023022) 

主　　题：烟草 染色体制备 酶解法 种质资源 染色体工程 

摘      要：【目的】开发一套适合烟草的染色体制备体系，为推进烟草染色体工程以及远缘杂交研究的系统开展奠定基础。【方法】以普通烟草为供试材料，利用酶解法进行染色体制备体系的构建。试验针对根尖组织8个时间段进行采样；利用4种方法进行预处理，包括对照（前期无任何处理）、20%风油精室温处理2 h、冰水混合物0℃处理48 h以及N2O处理，其中，N2O处理又分为20-70 min每间隔10 min取一次样；根尖样品分别在35、45和55 min不同时间下进行酶解。对每种处理方法或时长均进行了染色体制备并观察，根据染色体长度、清晰度及分散程度鉴定烟草染色体制备最佳方法。整合优化后的处理方法和时长，形成烟草染色体制备方法，并通过制备不同类型烟草品种的染色体样品进行体系的适用性验证。【结果】10∶30-12∶30为烟草根尖取样的理想时间，N2O预处理30-40 min，酶解45 min较为适宜，并利用该优化体系应用于普通烟草祖先种、普通烟草、远缘杂交衍生后代3个不同种质资源，均获得高质量染色体样品。【结论】建立了适用于烟草染色体的制备体系。利用该体系可在3 h内完成从烟草根尖取样到制备出合格的染色体样品。