黄萎病菌诱导下陆地棉酵母双杂交文库的构建及GhMAPKKK2互作蛋白的筛选

作     者：程贯富 张文祥 郭新悦 张国帅 吕晓迪 代培红 雷建峰 李月 CHENG Guanfu;ZHANG Wenxiang;GUO Xinyue;ZHANG Guoshuai;LYU Xiaodi;DAI Peihong;LEI Jianfeng;LI Yue

作者机构：新疆农业大学生命科学学院新疆乌鲁木齐830052 新疆农业大学农学院新疆乌鲁木齐830052 

出 版 物：《核农学报》 (Journal of Nuclear Agricultural Sciences)

年 卷 期：2025年第39卷第1期

页      面：68-76页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0904[农学-植物保护] 090401[农学-植物病理学] 090402[农学-农业昆虫与害虫防治] 

基　　金：国家自然科学基金(32160494) 新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目(2023D01E03) 新疆维吾尔自治区“天山英才”培养计划“三农”骨干人才-农业技术推广人才项目(2023SNGGNT063) 研究生科研创新项目(XJAUGRI2024030) 

主　　题：棉花 黄萎病菌 酵母双杂交 互作蛋白 GhMAPKKK2 

摘      要：为了探究棉花响应黄萎病菌侵染的分子机制并筛选GhMAPKKK2的互作蛋白,以陆地棉XLZ35为材料,基于Gateway克隆技术构建了棉花黄萎病菌诱导的陆地棉酵母双杂交文库,其中初级文库和次级文库的库容分别为1.2×10^(7)和2.0×10^(7)CFU,插入片段重组率均为100%且平均长度大于1000 bp。次级文库质粒浓度为953 ng·μL^(-1),符合构建酵母文库的标准,可用于酵母双杂交筛选互作蛋白。构建了pGBKT7-GhMAPKKK2表达载体,并验证了该载体对酵母细胞无毒性且不存在自激活活性。以GhMAPKKK2为诱饵蛋白,利用酵母文库初步筛选,获得81个阳性互作蛋白,经测序对比选取6个候选蛋白,通过酵母双杂交及双分子荧光互补试验(BiFC)验证,明确了候选蛋白GhFLA与GhMAPKKK2存在互作关系。本研究结果为解析GhMAPKKK2调控棉花抗黄萎病反应分子机制及调控网络提供了重要参考。