一种多房棘球绦虫亮氨酸氨基肽酶体外荧光底物酶活性检测方法

作     者：陈嘉瑀 戴瑶 王顺娟 肖杨 闫鑫宗 刘通 袁智浩 史凯丽 李润乐 汤锋 

作者机构：青海大学高原医学研究中心青海省高原医学应用基础重点实验室 青海大学研究生院 青海大学基础医学部 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2024年

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(No.32360192,No.81860299) 青海省科技厅项目(No.2024-ZJ-909)联合资助 

主　　题：多房棘球蚴 LAP Leu-AMC 酶活性 

摘      要：目的 构建多房棘球绦虫亮氨酸氨基肽酶（leucylaminopeptidase，LAP）体外荧光酶活性检测方法，并与化学发色底物酶活性检测方法进行对比。方法确立荧光底物体外酶活性检测方法的反应条件，并通过分子对接、抑制率、精密度对比荧光底物Leu-AMC与化学发色底物Leu-pNA之间的差异。结果分子对接结果显示荧光底物Leu-AMC与蛋白的亲和力大于化学发色底物Leu-pNA。通过观察改变反应条件对荧光强度的影响，确立荧光酶活性检测方法在反应温度为37 ℃、反应pH为9.0、蛋白浓度为800nmol/L、反应时长60min的情况下该检测方法反应效果显著。Leu-AMC在5μmol/L 的底物浓度和底物浓度变化的情况下有显著的反应效果和反应差异，通过加入不同抑制剂，荧光底物检测方法相较于化学发色底物检测方法有着更显著的组间差异。结论本研究构建了以Leu-AMC为底物的多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶体外荧光酶活性检测方法，与化学发色底物相比该方法有着更显著的组间差异和灵敏性。