外源性骨髓间充质干细胞在糖尿病模型大鼠体内向胰腺迁移并分化为胰岛细胞的趋势

作     者：肖红珍 张慧芹 刘阁玲 Xiao HZ;Zhang HQ;Liu GL

作者机构：河北医科大学唐山临床医学院内分泌科河北省唐山市063000 

出 版 物：《中国组织工程研究与临床康复》 (Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2007年第11卷第15期

页      面：2870-2873页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 

基　　金：河北省科学技术研究指导资助项目(课题编号:0527611013) 

主　　题：骨髓间充质干细胞 迁移 Y染色体标志物 糖尿病模型 

摘      要：目的:观察尾静脉注射骨髓间充质干细胞在糖尿病模型大鼠体内定向迁移至胰腺组织的规律。方法:实验于2004-08/2006-03在唐山工人医院中心实验室,华北煤炭医学院动物中心完成。实验材料:青年SD大鼠购自华北煤炭医学院动物中心(动物级别:SPF/VAF;许可证号:SCXK2002-0003)。实验方法:①采用密度梯度离心结合贴壁培养方法分离、纯化雄性大鼠骨髓间充质干细胞,并采用免疫组织荧光法鉴定。②将30只雌性大鼠完全随机分为3组:生理盐水组、骨髓间充质干细胞组、糖尿病模型组,每组10只。骨髓间充质干细胞组大鼠经尾静脉注射1×106L-1骨髓间充质干细胞0.2mL;生理盐水组大鼠尾静脉注射0.2mL生理盐水;糖尿病模型组检测大鼠各基础血糖值及体质量,按65mg/kg计算所需链脲佐菌素剂量,将其溶于柠檬酸钠缓冲液中,立即腹腔注射。用血糖仪及血糖试纸监测大鼠血糖,当血糖≥16.7mmol/L且稳定2d后经尾静脉注射1×106L-1骨髓间充质干细胞0.2mL。③应用原位杂交法检测雌性大鼠胰腺组织内Y染色体标志物及放射免疫法测定C-肽值。结果:30只大鼠均进入结果分析。①雌性大鼠腹腔注射链脲佐菌素后血糖检测:注射后2d血糖水平开始迅速升高,4d后血糖值大于16.7mmol/L且稳定在21mmol/L左右,30只大鼠均造模成功。②免疫荧光法检测骨髓间充质干细胞表型:呈抗Laminin染色阴性、抗CD44染色阳性。③放射免疫法检测雌性大鼠血清中C-肽值:与注射前比较,骨髓间充质干细胞组及糖尿病模型组注射骨髓间充质干细胞后,大鼠血清中C-肽值呈明显升高的趋势[注射前:(0.398±0.094),(0.263±0.011)μg/L;注射后:(0.443±0.109),(0.374±0.961)μg/L,P0.05或P0.01],生理盐水组无明显变化。④鼠胰腺组织石蜡切片中Y染色体标记物表达:生理盐水组大鼠胰腺组织中未见黄绿荧光Y染色体标记物存在,骨髓间充质干细胞组和糖尿病模型组大鼠胰腺组织中均可见黄绿荧光Y染色体标记物存在,糖尿病模型组大鼠胰腺组织中黄绿荧光强度较大、数量较多。结论:体外分离培养的骨髓间充质干细胞经尾静脉注射后,在糖尿病模型大鼠体内可迁移至胰腺组织中,并具有分化为胰岛素分泌细胞的可能性。