抗真菌肽CGA-N46基因多顺反子表达载体的构建与鉴定

作     者：李瑞芳 熊前程 张宗武 黄亮 王彬 LI Rui-fang;XIONG Qian-cheng;ZHANG Zong-wu;HUANG Liang;WANG Bin

作者机构：河南工业大学生物工程学院郑州450001 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2011年第31卷第12期

页      面：93-98页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：国家自然科学基金(31071922) 河南省重点科技攻关项目(0623030300 112102310325)资助项目 

主　　题：抗真菌肽 CGA-N46 多肽基因工程表达 多顺反子表达 载体构建 

摘      要：目的:为提高抗真菌肽CGA-N46表达量,对该基因多顺反子表达进行研究。方法:以pEASY-Blunt为克隆载体,以pET-30a rbs序列-起始密码子-CGA-N46编码序列-终止密码子为外源片段,利用同尾酶Nhe I、Spe I和Xba I,构建了含有上述外源片段1、3、5、8拷贝的重组载体pT-CAN46、pT-3CAN46、pT-5CAN46和pT-8CAN46;将pEASY-Blunt上的外源基因片段亚克隆至pET-30a的rbs序列下游,构建了CGA-N46基因1、3、5、8顺反子的重组表达载体pET-CAN46、pET-3CAN46、pET-5CAN46和pET-8CAN46;利用感受态转化法转化大肠杆菌Rosetta,进行了表达研究。结果:在IPTG诱导下,CGA-N46基因1、3、5、8顺反子重组表达载体均能表达CGA-N46单体,各重组表达载体表达CGA-N46的量在总蛋白中的百分含量分别为3.4%、5.0%、12.4%、17.1%。结果表明随着CGA-N46基因顺反子个数的增加,外源蛋白表达量也越来越多。其中,8顺反子表达量最高,实现了CGA-N46的高效表达。结论:多顺反子表达可以克服融合表达和串联表达肽类蛋白的不足;创建的多顺反子表达载体构建方法简化了传统基因工程构建方法的步骤,为基因工程有效提高小肽表达量奠定了基础。