剑豆SRAP-PCR反应体系的建立及优化

作     者：刘明骞 陈丽君 欧阳昆唏 丁美美 陈晓阳 LIU Mingqian;CHEN Lijun;OU-YANG Kunxi;DING Meimei;CHEN Xiaoyang

作者机构：华南农业大学林学院/广东省森林植物种质创新与利用重点实验室广东广州510642 华南农业大学教学科研基地管理中心广东广州510642 

出 版 物：《华南农业大学学报》 (Journal of South China Agricultural University)

年 卷 期：2015年第36卷第1期

页      面：75-78页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090202[农学-蔬菜学] 

基　　金：广州市科技计划项目(2010Z1-E241) 农业部948项目(2011-Z50) 

主　　题：剑豆 SRAP-PCR 均匀设计 优化 

摘      要：【目的】建立和优化剑豆Canavalia ensiformis的SRAP-PCR体系,为分析剑豆遗传多样性和建立遗传图谱打下基础.【方法】首先用单因素试验法对SRAP-PCR反应体系的5个主要影响因素(Mg2+、d NTPs、引物、Taq DNA聚合酶、模板DNA)各设8个浓度梯度进行试验,找到5个因素的适宜浓度范围,再采用均匀设计法进行5因素4水平和5因素3水平的2轮优化.【结果和结论】建立了剑豆SRAP-PCR最佳反应体系(25μL):Mg2+1.75 mmol/L,d NTPs 200μmol/L,引物0.36μmol/L,Taq DNA聚合酶0.06 U/μL,模板DNA 40 ng.所建立的体系稳定可靠,适用于剑豆后续的SRAP分析.