短发夹状RNA沉默H-ras基因对人涎腺腺样囊性癌细胞增殖的影响

作     者：于利洁 王洁 董福生 石宏 李荷香 顾洪涛 YU Li-jie;WANG Jie;DONG Fu-sheng;SHI Hong;LI He-xiang;GU Hong-tao

作者机构：河北医科大学口腔医学院口腔病理研究室石家庄050017 河北医科大学口腔医学院 口腔颌面外科石家庄050017 

出 版 物：《中华口腔医学杂志》 (Chinese Journal of Stomatology)

年 卷 期：2008年第43卷第2期

页      面：113-117页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：河北省自然科学基金(C2006000796) 

主　　题：基因,ras 癌,腺样囊性 质粒 RNA干扰 

摘      要：目的探讨H—ras基因对涎腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma，SACC）生物学特性的影响以及作为SACC基因治疗靶点的可行性。方法构建H—ras靶向H-ras—shRNA质粒及阴性对照HK-shRNA质粒，经脂质体介导转染SACC—M细胞，G418筛选建立稳定转染细胞株，将细胞分为H—ras-shRNA转染组、HK—shRNA转染组及未转染细胞组。绘制细胞生长曲线检测细胞体外增殖能力；反转录聚合酶链法分析各组细胞中H—ras基因mRNA表达变化；荧光蛋白定量分析H—ras蛋白表达水平；流式细胞术测定细胞周期及细胞凋亡情况；裸鼠成瘤实验检测细胞在体内的成瘤能力，分析H—ras沉默对细胞增殖及凋亡的影响。结果成功构建重组质粒并导入SACC—M细胞，建立稳定表达质粒的细胞株。H—ras—shRNA质粒能有效降低SACC—M细胞中H—ras表达，H—ras基因抑制率为61．80％，H—ras蛋白表达抑制率为62．76％。细胞增殖活性明显受抑，G0G1期比例增加；流式细胞术结果显示实验组细胞凋亡率为30．82％，显著高于阴性对照组及空白对照组的4．29％和4．16％。H—ras沉默细胞的裸鼠体内成瘤能力降低。结论H—ras靶向shRNA干扰质粒能持续有效的抑制SACC—M细胞中H—ras基因及蛋白水平的表达，降低细胞体内外的增殖活性，并能有效诱导细胞凋亡。