LPKp-人胰岛素基因逆转录病毒载体的构建与鉴定

作     者：王雪岷 Ripps ME Krause DS Sherwin RS WANG Xue-min;Ripps ME;Krause DS;Sherwin RS

作者机构：解放军总医院内分泌科北京100853 美国耶鲁大学医学院内分泌学系 美国耶鲁大学医学院实验室医学系 

出 版 物：《军医进修学院学报》 (Academic Journal of Pla Postgraduate Medical School)

年 卷 期：2009年第30卷第4期

页      面：537-539页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071006[理学-神经生物学] 

主　　题：启动子 胰岛素 逆转录病毒 载体 

摘      要：目的构建肝型丙酮酸激酶启动子(LPKp)与人胰岛素基因(hINSg)逆转录病毒表达载体并鉴定。方法1)母本pMDN-SIN及父本p54质粒扩增、纯化、酶切鉴定;2)取相关片段构建pM54载体并扩增、纯化、鉴定;3)脂质体法转染pM54进入pT67等细胞系,p54等质粒做对照基因;4)用转染后细胞上清液感染3T3细胞;5)ELISA法检测转染、感染后上清液INS含量鉴定质粒。结果酶切鉴定质粒大小与预期相符;ELISA法检测转染、感染上清液中均含较高水平INS。对照结果均阴性。结论LPKp-hINSg逆转录病毒表达载体pM54构建成功。实验为基因治疗或基因结合干细胞治疗糖尿病的进一步相关研究奠定了基础。