基于MDCK细胞单层的药物早期肾毒性检测初探

作     者：郝然 刘婷 王毅 胡剑江 曹春雨 回连强 张毅 

作者机构：中国中医科学院中药研究所北京100700 中国中医科学院医学实验中心北京100700 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2013年第19卷第12期

页      面：234-238页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：中国中医科学院自主选题项目(ZZ2006111) 

主　　题：MDCK细胞 药物肾毒性 早期检测 

摘      要：目的:初步探索基于犬肾小管上皮细胞(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞单层的药物早期肾毒性检测方法。方法:将MDCK细胞培养于微孔滤膜上,待其形成完整的细胞单层。通过MTT试验分别选择对MDCK细胞没有明显抑制及具有明显抑制的不同质量浓度作用于细胞单层,24 h后进行荧光素钠透过性试验以及细胞单层两侧分泌的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性检测,同时用扫描电镜观察细胞单层结构。结果:选择3.13,6.25,12.5 mg.L-13种质量浓度的马兜铃酸(aristolochic acid,AA)进行毒性检测,其对MDCK细胞生长的抑制率分别为-0.93%,0.93%和24.30%。AA 3.13 mg.L-1没有对细胞单层的完整性造成破坏,荧光素钠不能透过细胞单层,而AA 6.25,12.5 mg.L-1在与细胞作用30 min后,能明显增加荧光素钠的透过(P0.05,P0.1),其中12.5 mg.L-1造成的荧光素钠透过率增加更多。各组细胞单层两侧ALP,γ-GT的分泌没有明显改变,但12.5 mg.L-1能使LDH的分泌显著增加(P0.05)。扫描电镜观察显示,AA 6.25,12.5 mg.L-1组细胞单层结构被破坏,表面出现大量小球状物体,细胞单层破损而变得不完整,有不同程度的微孔滤膜露出。结论:基于MDCK细胞单层,在AA对细胞生长没有明显抑制的浓度(6.25 mg.L-1),可以检测到药物对细胞的毒性损伤,提示建立在微孔滤膜上的MDCK细胞单层体系可以用于药物肾毒性的早期检测。