核糖体蛋白S3a RNA干扰重组慢病毒载体的构建及其对细胞凋亡的影响

作     者：李英华 王婧 邱磊 厉建中 胡振林 张俊平 LI Ying-hua;WANG Jing;QIU Lei;LI Jian-zhong;HU Zhen-lin;ZHANG Jun-ping

作者机构：第二军医大学药学院生化药学教研室上海200433 

出 版 物：《第二军医大学学报》 (Academic Journal of Second Military Medical University)

年 卷 期：2015年第36卷第9期

页      面：947-951页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(91013014)~~ 

主　　题：核糖体蛋白S3a RNA干扰 慢病毒属 细胞凋亡 

摘      要：目的 构建小鼠核糖体蛋白S3a（RPS3a）特异性RNA干扰重组慢病毒载体（Lenti-shmRPS3a）,分析其对细胞凋亡的影响。方法 设计针对小鼠RPS3amRNA的4条干扰序列,合成相应的发夹序列,连接入慢病毒载体系统pLLU2GeGFP中构建重组质粒,将重组质粒与辅助包装质粒共转染293T细胞组装病毒,检测病毒滴度。病毒感染RAW264.7细胞后,RT-PCR和蛋白质印迹法检测干扰效果,流式细胞术分析其对凋亡的影响。结果 PCR和测序证明成功构建出LentishmRPS3a慢病毒载体,病毒滴度为（6~9）×107 TU/mL;RT-PCR表明Lenti-shmRPS3a的沉默效率高达72.64%,蛋白质印迹法证明RPS3a蛋白表达水平降低;流式细胞术证明感染了Lenti-shmRPS3a的细胞凋亡率较对照组升高（P〈0.05）。结论 表达小鼠RPS3ashRNA的慢病毒载体能有效沉默RPS3a基因表达,促进细胞凋亡。