采用Cre-loxP技术构建肝脏特异性Trappc11基因敲除小鼠模型

作     者：郑帆帆 李霞 高枫 李梦瑶 杨彦玲 李优磊 ZHENG Fan-fan;GAO Feng;LI Meng-yao;Li Xia;YANG Yan-ling;LI You-lei

作者机构：延安大学医学院陕西716000 延安市肥胖防治研究重点实验室延安大学附属医院内分泌代谢科 

出 版 物：《肝脏》 (Chinese Hepatology)

年 卷 期：2024年第29卷第9期

页      面：1137-1140,1153页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：陕西省教育厅科学研究项目(22JK0613) 陕西省自然科学基础研究计划(2024JC-YBQN-0949) 延安大学博士科研启动项目(YDBK2021-07) 

主　　题：转运蛋白颗粒复合物亚基11 Cre-loxP重组酶系统 组织特异性敲除 

摘      要：目的采用Cre-loxP系统构建肝脏组织特异性Trappc11基因敲除小鼠(Trappc11^(flox/flox)-Alb-Cre^(+/-))模型以探究脂肪肝的发病机制。方法用带有loxP位点的Trappc11纯合子小鼠(Trappc11^(flox/flox))和带有Alb-Cre的转基因小鼠(Alb-Cre^(+/-))进行杂交,对其子代进行基因型鉴定。筛选出Trappc11^(flox/+)-Alb-Cre^(+/-)小鼠,将其与Trappc11^(flox/flox)小鼠进一步杂交可获得Trappc11肝脏特异性敲除鼠。将3~4周龄的Trappc11^(flox/flox)-Alb-Cre^(+/-)、Trappc11^(flox/+)-Alb-^(Cre+/-)和Trappc11^(flox/flox)-Alb-^(Cre-/-)小鼠各3只,提取各组织脏器中的DNA,检测Trappc11的敲除效率和特异性。然后,在mRNA和蛋白质水平进一步验证。于第4周开始监测摄食量和体重等指标。结果我们成功繁育出肝脏特异性Trappc11基因敲除鼠,敲除心、脾、肺、肾、胰腺、肌肉、脂肪和脑组织中该基因表达未受影响,mRNA水平敲除效率达85%以上且TRAPPC11蛋白水平下降。该敲除鼠目前生长状态良好,饮食饮水正常,可用于后期繁殖与机制研究。结论已经构建成功的Trappc11flox/flox-Alb-Cre+/-鼠将为探索Trappc11在肝脏中的生理病理作用提供在体模型。