PS-MPs和DEHP联合暴露通过NO/iNOS/NF-κB通路诱导小鼠结肠上皮细胞自噬的作用机制研究

作     者：艾婧竹 徐世文 

作者机构：东北农业大学动物医学学院 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2024年

页      面：4678-4689页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：黑龙江省自然科学基金重点项目(ZD2023C002) 

主　　题：聚苯乙烯微塑料(PS-MPs) 邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP) NO/iNOS/NF-κB通路 小鼠结肠上皮细胞(MCEC) 自噬 

摘      要：【目的】探究聚苯乙烯微塑料（PS-MPs）和邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯（DEHP）联合暴露通过NO/iNOS/NF-κB通路诱导小鼠结肠上皮细胞（MCEC）自噬的作用机制。【方法】依据CCK-8法测定的PS-MPs和DEHP对MCEC的半数抑制浓度(IC50),将MCEC分为5组:对照组、PS-MPs组、DEHP组、联合组和抑制组,各组MCEC分别用培养基及含有200μg/L PS-MPs、100μmol/L DEHP、200μg/L PS-MPs+100μmol/L DEHP、200μg/L PS-MPs+100μmol/L DEHP+5 nmol/L硼替佐米（PS-341）的培养基处理24 h后,采用生化试剂盒检测NO含量及iNOS活性,通过MDC法检测自噬小体,利用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR和Western blotting检测自噬,以及NO/iNOS/NF-κB通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平。【结果】PS-MPs和DEHP均可抑制MCEC的活力,且IC50分别为2 315μg/L和1 477μmol/L。与对照组相比,PS-MPs、DEHP、联合组细胞中NO含量、iNOS活性及NO/iNOS/NF-κB通路相关基因的mRNA和蛋白表达水平均显著升高（P0.05）,MDC法与免疫荧光染色的荧光强度均显著增强（P0.05）,MCEC的自噬相关基因（Beclin1、ATG5、LC3-B）的mRNA和蛋白表达水平显著上调（P0.05）;PS-341可显著缓解PS-MPs和DEHP对MCEC暴露引起的上述检测指标的变化。【结论】联合暴露于PS-MPs和DEHP可激活iNOS,使NO含量激增,上调NO/iNOS/NF-κB通路,从而诱导小鼠结肠上皮细胞自噬。