Lnc CPS1-IT1靶向调控内皮-间质转化抑制OSA所致肺动脉高压的机制

作     者：魏丽 陈昊 王秋波 张泽明 Wei Li;Chen Hao;Wang Qiubo;Zhang Zeming

作者机构：上海健康医学院附属周浦医院呼吸内科 上海 

出 版 物：《国际呼吸杂志》 (International Journal of Respiration)

年 卷 期：2024年第44卷第9期

页      面：1012-1022页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 100213[医学-耳鼻咽喉科学] 10[医学] 

基　　金：上海市卫生健康委员会卫生行业临床研究专项(202140352) 

主　　题：睡眠呼吸暂停, 阻塞性 高血压, 肺性 RNA, 长链非编码 NF-κB 缺氧诱导因子1, α亚基 CPS内含子转录本1 内皮-间质转化 

摘      要：目的探讨在低氧环境下, 长链非编码RNA CPS1内含子转录本1(Lnc CPS1-IT1)通过影响内皮-间质转化(EndoMT)治疗阻塞性睡眠呼吸暂停(OSA)所致肺动脉高压(PH)的分子调控机制。方法本研究为实验研究。以人脐静脉内皮细胞构建OSA的细胞模型, 并使用该模型分别构建空白对照组, 空过表达载体组(阴性对照过表达载体), 长链非编码RNA CPS1内含子转录本1(Lnc CPS1-IT1)过表达组(Lnc CPS1-IT1过表达载体), 空沉默载体组(阴性对照沉默载体), 沉默Lnc CPS1-IT1组(沉默Lnc CPS1-IT1的短发夹RNA);使用吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)阻断细胞核因子κB(NF-κB)信号通路构建Lnc CPS1-IT1过表达+PDTC组。比较空过表达载体组与Lnc CPS1-IT1过表达组, 空沉默载体组与沉默Lnc CPS1-IT1组EndoMT相关分子标志物[血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、锌指转录因子(SNAIL)]和胶原蛋白(Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原)mRNA、蛋白表达, 以及促炎细胞因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-10、IL-13]的水平。通过Transwell测定法检测Lnc CPS1-IT1对于细胞迁移能力的影响。RNA免疫沉淀和荧光素酶报告基因法检测Lnc CPS1-IT1和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的结合情况。比较PDTC处理前后EndoMT相关分子标志物和胶原蛋白mRNA、蛋白表达, 以及促炎细胞因子的水平。结果 Lnc CPS1-IT1过表达组CD31 mRNA和蛋白表达均较空过表达载体组升高, α-SMA、SNAIL、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白表达均较空过表达载体组降低, 差异均有统计学意义(均P0.001)。沉默Lnc CPS1-IT1组中CD31 mRNA和蛋白表达均较空沉默载体组降低, α-SMA、SNAIL、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白表达均较空沉默载体组升高, 差异均有统计学意义(均P0.001)。Lnc CPS1-IT1过表达组TNF-α、IL-10、IL-13的水平均较空白过表达载体组降低, 沉默Lnc CPS1-IT1组TNF-α、IL-10、IL-13的水平均较空白沉默载体组升高, 差异均有统计学意义(均P0.001)。与空白对照组(49.33±2.52)相比, Lnc CPS1-IT1过表达组细胞迁移数量减少(30.00±2.65), 而沉默Lnc CPS1-IT1组细胞迁移数量增多(82.00±4.00), 差异均有统计学意义(均P0.001)。RNA免疫沉淀结果显示, Lnc CPS1-IT1与HIF-1α的结合较免疫球蛋白G增加, 差异有统计学意义[(4.22±0.03)比(0.99±0.02), t=163.50, P0.001]。荧光素酶报告基因法检测结果显示, Lnc CPS1-IT1与HIF-1α结合后的荧光强度下降[(120.33±2.83)比(24.33±2.12)], 差异有统计学意义(t=43.42, P0.001)。Lnc CPS1-IT1过表达+PDTC组CD31 mRNA和蛋白质较Lnc CPS1-IT1过表达组升高, α-SMA、SNAIL、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的mRNA和蛋白质均较Lnc CPS1-IT1过表达组降低, 差异均有统计学意义(均P0.001)。Lnc CPS1-IT1过表达+PDTC组TNF-α、IL-10、IL-13水平均较Lnc CPS1-IT1过表达组下降(均P0.05)。结论 Lnc CPS1-IT1可以通过抑制HIF-1α的转录活性影响NF-κB通路, 降低炎症因子的释放, 靶向调控EndoMT, 从而抑制OSA所致PH。