miR-140-3p.2靶向PD-L1表达增强CD8+T细胞对肝癌细胞的杀伤作用

作     者：张博洋 苏荣荣 

作者机构：北京大学医学部基础医学院 北京明日达科技发展有限责任公司 

出 版 物：《药物评价研究》 (Drug Evaluation Research)

年 卷 期：2024年第10期

页      面：2309-2316页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：miR-140-3p.2 程序性死亡受体配体1 CD8+T细胞 肝癌 肿瘤坏死因子-α γ干扰素 

摘      要：目的 探究miR-140-3p.2靶向程序性死亡受体配体1（PD-L1）表达对细胞毒性T细胞（CD8+T细胞）杀伤肝癌细胞的影响。方法 实时荧光定量PCR（qRT-PCR）、Western blotting检测L-02和HepG2、Hep3B、HuH-7细胞系中miR-140-3p.2和PD-L1 mRNA和蛋白水平；Targetscan数据库预测miR-140-3p.2和PD-L1的结合位点，并利用双荧光素酶实验进行验证；HepG2细胞分为过表达miR-140-3p.2（miR-140-3p.2）组及其对照（miR-NC）组、过表达PD-L1（PD-L1）组及其对照（NC）组、过表达miR-140-3p.2和PD-L1（miR-140-3p.2+PD-L1）组、过表达miR-140-3p.2和PD-L1对照（miR-140-3p.2+NC）组；qRT-PCR、Western blotting实验分别检测各组细胞中miR-140-3p.2和PD-L1 mRNA和蛋白水平。30只裸鼠分为过表达miR-140-3p.2（miR-140-3p.2）组及其对照（miR-NC）组，每组各15只，采用sc过表达miR-140-3p.2及其对照（miR-NC）的HepG2细胞制备移植瘤模型；检测肿瘤质量及体积；分离裸鼠脾脏组织CD8+T细胞，并与各转染HepG2细胞共培养，细胞毒性实验检测细胞裂解率，ELISA法检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ干扰素（IFN-γ）水平；ELISA法检测移植瘤中TNF-α、IFN-γ水平，流式细胞术检测移植瘤中CD8+T细胞浸润情况。结果 与L-02细胞相比，HepG2、Hep3B、HuH-7细胞中miR-140-3p.2水平降低，PD-L1 mRNA和蛋白水平升高（P0.05）。与miR-NC组相比，miR-140-3p.2组细胞中miR-140-3p.2水平升高，PD-L1 mRNA和蛋白水平降低，细胞裂解率升高，细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平升高（P0.05）；与NC组相比，PD-L1组细胞中miR-140-3p.2水平降低，PD-L1 mRNA和蛋白水平升高，细胞裂解率降低，细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平降低（P0.05）；过表达PD-L1能部分逆转过表达miR-140-3p.2对上述指标的影响（P0.05）。裸鼠成瘤4周后，与miR-NC组相比，miR-140-3p.2组移植瘤体积和质量明显减小（P0.05），移植瘤中miR-140-3p.2水平明显升高、PD-L1 mRNA和蛋白水平明显降低（P0.05）,CD8+T细胞浸润水平明显升高（P0.05）,TNF-α、IFN-γ水平明显升高（P0.05）。结论 miR-140-3p.2靶向PD-L1表达增强CD8+T细胞对肝癌细胞的杀伤作用。