一种定量保存金黄色葡萄球菌真空冷冻干燥技术方法的设计

作     者：崔雯 赵良 时玉雯 陈潇 刘辉 

作者机构：济南市疾病预防控制中心细菌性疾病检验所 济南市儿童医院麻醉科 

出 版 物：《预防医学论坛》 (Preventive Medicine Tribune)

年 卷 期：2024年第8期

页      面：614-619页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：山东省济南市卫生健康委员会公共卫生计划专项(2021-公-03) 

主　　题：金黄色葡萄球菌 定量保存 真空冷冻干燥 冻干保护剂 细菌存活率 

摘      要：目的 探究一种利用真空冷冻干燥技术定量保存标准菌株金黄色葡萄球菌的新方法。方法 在真空冷冻干燥的条件下，使用微滤孔膜制备金黄色葡萄球菌冻干菌片，分别从生长曲线、单一冻干保护剂的筛选、保护剂的优化复配、真空冷冻预冻温度和冷冻温度、保存条件以及有效期分析对冻干菌片的菌种存活率的影响。结果 生长曲线结果显示，金黄色葡萄球菌4 h后进入生长对数期，16 h后进入生长稳定期。单一保护剂分别从糖类、蛋白质类和抗氧化剂中筛选，结果显示脱脂牛奶、海藻糖和抗坏血酸的细菌存活率最高（F=6.7,P0.05,Adj R2=0.785 5）,利用响应曲面法优化冻干保护剂的配方为脱脂牛奶（3%）、海藻糖（10%）以及抗坏血酸（0.75%）。在该保护剂的作用下，冻干菌片的细菌存活率可达90%以上，与预测值较为相似，证明响应曲面法优化保护剂配方有效。冻干菌片在预冻温度-20℃、冷冻温度-40℃的冷冻条件下，细菌存活率最高（F=147.0,R2=0.982 9,P0.001）。在-40℃的冰箱保存6个月后金黄色葡萄球菌的存活率可达93.3%,保存2年后细菌存活率仍可达80%以上（F=79.42,R2=0.969 5,P0.001）。结论 利用真空冷冻干燥技术制备菌片用于定量保存金黄色葡萄球菌，用复配的保护剂制备的金黄色葡萄球菌冻干菌片可达到有效的定量保存效果。