TaqMan荧光定量PCR检测滑液囊支原体方法的建立及其感染鸡血液内载量测定

作     者：朱悦 祁晶晶 武梦思 张广冻 丁思羽 陈玥彤 高崧 于圣青 ZHU Yue;QI Jingjing;WU Mengsi;ZHANG Guangdong;DING Siyu;CHEN Yuetong;GAO Song;YU Shengqing

作者机构：扬州大学兽医学院江苏扬州225009 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 扬州优佳创生物科技有限公司江苏扬州225261 锦州医科大学畜牧兽医学院辽宁锦州121000 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2024年第51卷第9期

页      面：3648-3657页

核心收录：

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：扬州市市级计划-现代农业项目(YZ2022046) 国家重点研发计划(2016YFD0500805) 

主　　题：滑液囊支原体 TaqMan荧光定量PCR 攻毒模型 增殖变化 

摘      要：【背景】滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是禽类的常见病原,严重危害家禽养殖业的发展。MS易与其他病原混合感染,给临床诊断造成困难,因此亟须建立一种快速、准确、灵敏的检测方法对疑似患病禽进行快速诊断,以降低经济损失。【目的】建立一种检测MS的TaqMan荧光定量PCR方法,测定MS在感染鸡血液内的载量变化,为临床检测MS感染提供技术支持。【方法】参考GenBank中登录的MS基因保守区域序列设计特异性引物和探针,以温度梯度qPCR法确定最适退火温度,用矩阵法优化其引物和探针加入量,通过提取MS 0801基因组作为模板构建标准曲线,并进行特异性、灵敏度、重复性试验,建立一种检测MS的TaqMan荧光定量PCR方法。使用建立的方法检测滴鼻攻毒和足垫攻毒后MS在感染鸡血液内的载量变化。【结果】建立的TaqMan荧光定量PCR方法最佳退火温度为55℃,引物和探针(10 mol/L)加入量分别为0.8 mL和0.4 mL;扩增曲线具有良好的线性关系,R^(2)0.99;特异性强,仅对MS有特异性反应,对其他病原均无扩增反应;敏感性高,最低检测限为25 copies/μL;重复性好,批间试验和批内试验变异系数均小于2%。通过TaqMan荧光定量PCR检测MS在感染鸡血液内的动态变化,发现两个攻毒组MS含量的峰值和总体波动无明显差异,但足垫攻毒的MS在血液中的增殖要快于滴鼻攻毒。【结论】本实验建立了一种能够快速检测MS的TaqMan荧光定量PCR方法,并用于检测MS在感染鸡血液内的动态变化,为临床上检测MS感染提供了技术支撑,为疫苗免疫评价方法提供了新的思路。