RNA干扰技术抑制smad4基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响

作     者：吴鹏 田媛 桂伶俐 陈刚 卢运萍 周剑锋 马丁 WU Peng;TIAN Yuan;GUI Ling-li;CHEN Gang;LU Yun-ping;ZHOU Jian-feng;MA Ding

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院麻醉科武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院血液内科武汉430030 

出 版 物：《肿瘤》 (Tumor)

年 卷 期：2007年第27卷第3期

页      面：167-171页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(编号:30371657) 国家重大基础研究项目资助(编号:2002CB513107) 

主　　题：宫颈肿瘤 RNA干扰 基因表达调控 基因 smad4 

摘      要：目的:探讨用RNA干扰技术下调smad 4基因表达对宫颈癌细胞增殖的影响。方法:用DNA重组技术将针对人smad 4基因不同部位所设计的三对短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中,构建smad4 shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3。脂质体介导转染人宫颈癌细胞株HeLa,经G418筛选抑制smad4表达的稳定细胞克隆。MTT法、克隆形成实验、流式细胞术检测抑制smad4基因对宫颈癌细胞增殖的影响。结果:成功构建分别携带三段shRNA及空载体对照的重组质粒pGenesil-smad4-shRNA1、2、3和pGenesil-con,三种shRNA重组质粒中pGenesil-smad4-shRNA2可明显降低细胞内smad4 mRNA及smad4蛋白表达,筛选出的HeLa/shRNA2细胞增殖能力明显增强。结论:应用RNA干扰技术能筛选出特异而高效阻断smad 4基因表达及功能的shRNA,smad 4基因表达下调能明显促进宫颈癌细胞生长。