基于网络药理学及体外实验探究原阿片碱抑制肺纤维化的作用机制

作     者：杨元梅 杨钰涵 吴亚云 

作者机构：贵州医科大学临床医学院 香港理工大学 

出 版 物：《海南医学院学报》 (Journal of Hainan Medical University)

年 卷 期：2024年

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：贵州省科学技术厅项目[黔科合支撑(2021)一般008] 

主　　题：原阿片碱 肺纤维化 A549细胞 上皮-间质转化 网络药理学 

摘      要：目的：基于网络药理学和体外实验探究原阿片碱（protopine，PTP）抑制肺纤维化的作用机制。方法：采用网络药理学筛选出PTP抗肺纤维化的核心靶点，对PTP抗肺纤维化的相关通路进行预测。通过转化生长因子-β1（transforming growth factor beta1，TGF-β1）诱导人A549细胞构建体外肺纤维化模型，对网络药理学的研究结果进行验证。实验分为对照组、TGF-β1组、吡非尼酮（pirfenidone，PFD）处理组、PTP处理组。CCK8法检测细胞增殖活性；倒置显微镜观察细胞形态；细胞划痕实验检测细胞迁移能力；实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测E-钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、纤维连接蛋白（fibronectin，FN）mRNA及Ⅰ型胶原（collagen Ⅰ）mRNA的表达水平；蛋白质印迹技术（Western blotting）评估E-cadherin、Vimentin、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）以及纤维连接蛋白（FN）的表达量。正置荧光显微镜下观察E-cadherin、FN蛋白的表达情况。结果：网络药理学结果显示PTP主要作用于ALB、AKT1、EGFR、HSP90AA1、SRC等核心靶点和癌症通路、PI3K-Akt等信号通路。体外研究发现，相较于未处理的对照组，经TGF-β1处理后，A549细胞呈现出从典型的上皮细胞形态向成纤维细胞样形态的转换，间质细胞标志物α-SMA、Vimentin、FN及Collagen Ι表达升高，上皮细胞标志物E-cadherin表达降低，细胞迁移能力增强。经PTP处理后，PTP能显著抑制TGF-β1诱导的A549细胞的增殖及迁移能力；上调细胞中E-cadherin的蛋白及基因表达水平，同时下调Vimentin、α-SMA、FN的蛋白表达水平。结论：PTP可能通过抑制TGF-β1诱导的上皮-间质转化改善肺纤维化。