基于噬菌体核酸检测霍乱弧菌的TaqMan-qPCR方法的建立

作     者：陈曦 闫梅英 文远汐 阚飙 樊粉霞 

作者机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所 山东大学公共卫生学院 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2024年第8期

页      面：97-104页

核心收录：

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家重点研发计划(2021YFC2300304)资助项目 

主　　题：噬菌体 TaqMan-qPCR DNA检测 灵敏度 霍乱弧菌 

摘      要：目的：建立一种基于噬菌体特异基因检测霍乱弧菌的TaqMan-qPCR方法。方法：基于VP1噬菌体的特异性基因gp46,建立TaqMan-qPCR方法，根据VP1潜伏期为50～60 min,爆发周期持续110～120 min,确定TaqMan-qPCR体系检测时间点。比对分析基于gp46与基于霍乱弧菌毒力基因ctxB建立的两种TaqMan-qPCR方法。结果：基于VP1噬菌体gp46成功建立TaqMan-qPCR反应，扩增效率接近93%,Ct值与样本中噬菌体浓度的相关系数高达0.998。TaqMan-qPCR和琼脂双层噬菌斑计数两种方法结果一致性很高，偏差低于2.45%。基于噬菌体gp46基因比基于毒力基因ctxB建立的TaqMan-qPCR方法的LB模拟样本灵敏度提高10倍，粪便及环境水体模拟样本灵敏度可提高100倍。结论：成功建立快速、高灵敏度和高特异性的TaqMan-qPCR方法，可实现在几小时内对含有霍乱弧菌疑似样本进行快速检测。