基于VEGFA/VEGFR2信号通路探讨化瘀明目方含药血清抑制HRMECs功能紊乱模型血管生成的分子机制

作     者：马孝秋 左韬 马贤德 赵磊 李进 

作者机构：辽宁中医药大学第二临床学院 辽宁中医药大学附属第二医院 辽宁中医药大学教学实验中心 辽宁中医药大学发展研究中心 

出 版 物：《中药新药与临床药理》 (Traditional Chinese Drug Research and Clinical Pharmacology)

年 卷 期：2024年

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(82104714) 国家中医药管理局“中医药循证能力建设项目”(No.2019XZZX-YK008) 

主　　题：化瘀明目方 人视网膜微血管内皮细胞 血管内皮生长因子A/血管内皮生长因子受体2—磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路 

摘      要：目的 探讨化瘀明目方含药血清通过抑制血管内皮生长因子A（VEGFA）/血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）信号通路干预人视网膜微血管内皮细胞（HRMECs）血管生成的分子机制。方法 制备高剂量化瘀明目方含药血清，CCK-8法筛选适宜的血管内皮生长因子（VEGF）浓度(5、10、20和40 ng·mL-1)，并分别复制高糖、VEGF诱导的HRMECs功能紊乱模型，设空白组、高糖模型组、高糖干预组、VEGF模型组、VEGF干预组。划痕实验检测细胞细胞迁移能力；管腔形成实验检测细胞管腔形成能力；流式细胞术检测细胞凋亡率；免疫酶细胞化学技术、WesternBlot及RT-PCR检测细胞VEGFA、VEGFR2、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、胱天蛋白酶-9（Caspase-9）、Bcl-2相关死亡促进因子（Bad）蛋白及mRNA表达水平。结果 与空白组比较，高糖模型组与VEGF模型组细胞迁移距离、管腔形成数均明显增加（P0.01），VEGFA、VEGFR2、PI3K、AKT蛋白及mRNA表达水平均明显升高（P0.01）；与高糖模型组和VEGF模型组比较，化瘀明目方含药血清干预后细胞迁移距离降低（P0.01）、管腔形成数减少（P0.01，P0.05），细胞凋亡率上升（P0.01，P0.05），VEGFA、VEGFR2、PI3K、AKT表达水平降低（P0.01，P0.05、P0.01），Caspase-9、Bad表达水平升高（P0.01，P0.05、P0.01）。结论 化瘀明目方含药血清可通过抑制VEGFA/VEGFR2-PI3K/AKT信号通路上调Caspase-9、Bad表达，对抗高糖、VEGF诱导的促视网膜血管新生效应，预防或减少血管新生。