miR-155调控巨噬细胞极化并经外泌体介导足细胞损伤的作用机制研究

作     者：徐璐瑶 张洁 林栩 XU Luyao;ZHANG Jie;LIN Xu

作者机构：右江民族医学院研究生学院百色533000 右江民族医学院附属医院肾内科百色533000 广西免疫相关性疾病医学科研基础保障重点实验室百色533000 

出 版 物：《中国临床新医学》 (CHINESE JOURNAL OF NEW CLINICAL MEDICINE)

年 卷 期：2024年第17卷第8期

页      面：852-859页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100210[医学-外科学(含：普外、骨外、泌尿外、胸心外、神外、整形、烧伤、野战外)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(编号:82060133,81860131) 广西自然科学基金项目(编号:2017GXNSFAA198288,2019GXNSFDA245004) 

主　　题：miR-155 巨噬细胞 外泌体 足细胞损伤 凋亡 炎症因子 

摘      要：目的探讨miR-155调控巨噬细胞极化并经外泌体介导足细胞损伤的作用机制。方法选择巨噬细胞RAW264.7和肾小球足细胞MPC5进行实验。将miR-155mimics、miR-155mimicsNC、miR-155inhibitor和miR-155inhibitorNC慢病毒转染至RAW264.7细胞,构建miR-155过表达/低表达巨噬细胞系及其对照,分离巨噬细胞外泌体。采用流式细胞术检测各组巨噬细胞M1/M2表型比值。采用Transwell法将RAW264.7细胞与MPC5细胞进行共培养,分别于共培养12h、24h后采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测巨噬细胞miR-155表达水平;采用Westernblot法检测巨噬细胞IL-6、IL-10表达水平,以及肾小球足细胞synaptoporin和nephrin表达水平;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肾小球足细胞IL-1β、IL-10表达水平;采用TUNEL染色法检测肾小球足细胞凋亡情况。结果成功构建miR-155过表达/低表达巨噬细胞系并分离其外泌体。miR-155过表达可诱导巨噬细胞极化为M1型,抑制miR-155可诱导巨噬细胞极化为M2型。在miR-155mimics慢病毒转染至巨噬细胞24h后,其miR-155表达水平显著增加(P0.05),并上调IL-6的表达水平(P0.05),抑制IL-10的表达水平(P0.05),经Transwell共培养使足细胞synaptoporin、nephrin表达水平下降(P0.05),IL-1β表达水平升高(P0.05),并促进足细胞发生凋亡。而转染miR-155inhibitor慢病毒至巨噬细胞后所得结果趋势与miR-155mimics相反。RT-qPCR检测结果显示,miR-155mimics组巨噬细胞外泌体中miR-155水平显著升高(P0.05),miR-155inhibitor组巨噬细胞外泌体中miR-155水平显著降低(P0.05)。结论miR-155过表达可诱导巨噬细胞极化为M1型,并通过外泌体介导引发足细胞损伤,而下调miR-155表达则逆转这一作用。