人IL-10基因重组复制缺陷型腺病毒DNA的构建

作     者：陈紫千 汤耀卿 张奕 张轶 张圣道 刘新垣 邹卫国 

作者机构：上海第二医科大学瑞金医院消化外科上海200025 中国科学院上海生命科学院细胞生化所 

出 版 物：《上海第二医科大学学报》 (Acta Universitatis Medicinalis Secondae Shanghai)

年 卷 期：2004年第24卷第9期

页      面：720-722页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：上海市科委基金(00419019)资助项目 

主　　题：IL—10 缺陷型 IL-10 重组腺病毒 体外感染 表达 DNA 阳性克隆 质粒 基因重组 

摘      要：目的 构建人IL-10基因的重组腺病毒并进行体外表达和检测。方法从质粒pcDNA3IL-10的CMV启动子下游完整切下IL-10 cDNA的片段,将其定向插入Gateway载体,在克隆酶的作用下将阳性克隆质粒转入目的腺病毒载体。PacI酶线性化IL-10腺病毒DNA后阳离子质脂体转染293A细胞,获得人IL-10的复制缺陷型重组腺病毒。体外感染人胰腺癌细胞株Bxpc-3和大鼠胰腺细胞株AR-42J;Western blot检测人IL-10的表达。结果 成功地构建人IL-10重组腺病毒,病毒滴度达2×109PFU/mL。体外感染的细胞株均检测到IL-10的表达。结论 构建复制缺陷型重组腺病毒能够介导IL-10的基因表达,为细胞因子的抗炎冶疗奠定实验基础。