转染突变型α-半乳糖苷酶A基因诱导细胞自噬异常及其作用机制探讨

作     者：徐春晓 刘靖 康曼德 赵亚雯 张巍 王朝霞 袁云 Xu Chunxiao;Liu Jing;Kang Mande;Zhao Yawen;Zhang Wei;Wang Zhaoxia;Yuan Yun

作者机构：北京大学第一医院神经内科100034 

出 版 物：《中华神经科杂志》 (Chinese Journal of Neurology)

年 卷 期：2015年第48卷第7期

页      面：551-555页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 1009[医学-特种医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(81100840) 

主　　题：法布里病 α半乳糖苷酶 微管相关蛋白质类 自噬 凋亡调节蛋白质类 

摘      要：目的 研究α-半乳糖苷酶A（GLA）基因突变对细胞自噬水平的影响,并初步探讨其作用机制.方法 选取通过超微病理检查、GLA活性检测和GLA基因突变筛查确诊的两个法布里病家系,分别构建两个家系GLA基因突变型重组表达质粒[pcDNA3.1-GFP-ex1（EX1组）,pcDNA3.1-GFP-ex3（EX3组）]及GLA野生型重组表达质粒（pcDNA3.1-GFP-GLA,GLA组）,利用脂质体法将重组表达质粒瞬时转染至Hela细胞中培养.对照组为未进行转染的Hela细胞系.利用实时PCR及Western印迹法检测各组自噬基因及自噬途径相关蛋白（LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,Beclin-1,P62/ SQSTM1）的表达.结果 EX1组、EX3组、GLA组和对照组LC3半定量值分别为1.495±0.064、1.490±0.020、1.285 ±0.021、1.260±0.042;P62/ SQSTM1半定量值分别为0.555±0.086、0.480±0.084、0.785±0.439、0.980±0.278;Beclin-1 mRNA 2-ΔCt值分别为0.011±0.003、0.008±0.002、0.005±0.001、0.003 ±0.001;Beclin-1蛋白半定量值分别为1.178±0.098、1.209±0.092、0.931±0.100、0.796±0.184.与野生型相比,两组转染突变型GLA组中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平上调（t=5.118、4.984,P=0.007、0.008）,多聚泛素结合蛋白P62/ SQSTM1表达水平差异无统计学意义（t=1.052、1.400,P=0.323、0.199）,自噬基因Beclin-1 mRNA（t=3.800、2.445,P=0.005、0.040）及蛋白（t=2.424、2.729,P=0.042、0.026）表达水平均上调.结论 突变GLA基因可诱导细胞自噬水平上调,并可能通过Beclin-1依赖性信号通路诱导细胞自噬活化.