实时荧光定量PCR检测RAGE mRNA方法的建立及初步应用

作     者：景蓉蓉 王惠民 鞠少卿 祝文彩 张志泉 

作者机构：南通大学附属医院南通大学公共卫生学院江苏南通226001 

出 版 物：《临床检验杂志》 (Chinese Journal of Clinical Laboratory Science)

年 卷 期：2008年第26卷第1期

页      面：55-58页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

主　　题：晚期糖基化终末产物受体 实时荧光定量PCR 食管癌 

摘      要：目的建立实时荧光定量PCR（RTFQ-PCR）检测人晚期糖基化终末产物受体（RAGE）mRNA的方法并研究其在食管癌组织中的表达。方法根据Genebank提供的序列在RAGE基因外显子5和6之间设计引物，应用SYBR GreenⅠ荧光染料，建立检测RAGE mRNA的RTFQ-PCR方法，并对其线性、特异性、灵敏度及重复性进行评价；根据标准曲线计算出食管癌及配对远端正常组织中RAGE mRNA含量，并以RAGE mRNA和18SrRNA含量的比值作为评价RAGE mRNA表达水平指标。结果线性范围为5．0×10^3～5．0×10^9copies／ml，相关系数为-0．98，批内变异系数（CV）为0．63％～8．71％，批间CV为1．52％～12．38％。食管癌及配对远端正常组织RAGE mRNA与18SrRNA浓度的对数比值（^-x±s）分别为0．638±0．068和0．334±0．329（P〈0．005），提示食管癌组织RAGE表达上调。结论RTFQ-PCR检测RAGE mRNA的方法具有灵敏、特异、重复性好等优点，RAGE mRNA表达水平与食管癌存在一定相关性。