三位点短发卡状RNA在提高RNA干扰效率中的作用

作     者：翁艳洁 翁丹卉 夏曦 宋晓红 卢运萍 王世宣 马丁 王常玉 WENG Yan-jie;WENG Dan-hui;XIA Xi;SONG Xiao-hong;LU Yun-ping;WANG Shi-xuan;MA Ding;WANG Chang-yu

作者机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科湖北武汉430030 

出 版 物：《中国癌症杂志》 (China Oncology)

年 卷 期：2008年第18卷第4期

页      面：249-253页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(编号:30571950) 国家自然科学基金资助项目(编号:30528012) 国家973重点基础科学基金资助项目(编号:2002CB513107) 

主　　题：RNA干扰 外源基因 DsRed 短发卡状RNA 

摘      要：背景与目的:shRNA技术是近来发展的热点技术之一,但普遍采用的单位点shRNA干扰载体效果并不理想。本研究探讨三位点短发卡状RNA在提高RNA干扰效率中的作用。方法:构建外源基因DsRed全长载体转染HEK293细胞。针对报告基因DsRed设计4个干扰载体,一个含有3段shRNA,另外3个分别含有此3段中1段shRNA。转染293/DsRed,荧光显微镜观察基因DsRed。应用实时定量PCR(Real-timePCR)和流式细胞仪(FACS)检测4个载体对DsRed基因在mRNA及蛋白水平干扰效应。结果:4个载体对靶基因DsRed在mRNA及蛋白水平均有干扰效应,且含有3段shRNA载体对DsRed基因干扰效率为(89±16)%,显著高于3个只含有1段shRNA载体[(50±23)%,(52±15)%,(55±27)%],差异有显著性(P0.05)。结论:三位点shRNA干扰载体可以提高对靶基因的干扰效率。