小麦原生质体的电激介导基因转移
Gene Transformation of Wheat Protoplasts by Electroporation作者机构：北京市植物细胞工程实验室 日本国立农业生物资源研究所
出 版 物：《华北农学报》 (Acta Agriculturae Boreali-Sinica)
年 卷 期：1996年第11卷第3期
页 面：25-30页
核心收录：
摘 要：从小麦品种“Ｂｏｄａｌｉｎ胚性悬浮细胞分离出原生质体，通过电激将质粒ＰＢＣ１ＤＮＡ（携带β－葡萄糖苷酸酶（ＧＵＳ）标记基因和潮霉素抗性基因ｈｐｈ）导入原生质体。采用ＢＴＸ电激系统和ＡＳＰ电激缓冲液，最佳电激条件为３００Ｖ（７５０Ｖ／ｃｍ）和５０ｍｓ（约１０００μＦ），转化的原生质体内ＧＵＳ的活性最高；质粒ＤＮＡ的有效使用浓度为２５μｇ／ｍｌ。电激处理后，原生质体培养２～３天，ＧＵＳ基因表达最强，宜于检测其瞬时表达；牛胸腺ＤＮＡ可协助提高ＧＵＳ基因的导入效果。质粒ＰＢＣ１ＤＮＡ处理的原生质体培养于添加潮霉素的ＫＭＰ培养基。经４个月抗性筛选。
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